[发明专利]表达抗VEGF融合蛋白的AAV病毒载体及其应用

说明书

本发明人涉及一种表达抗VEGF融合蛋白的AAV病毒载体及其应用。具体地，本发明了涉及一种包含编码抗VEGF融合蛋白的核苷酸序列的重组AAV病毒载体及其应用。本发明的重组AAV病毒在小鼠细胞内的感染效果优异，且在细胞核内稳定表达，能有效抑制眼内VEGF表达,减轻激光损伤导致的渗漏和血管新生，因此可用于制备治疗VEGF相关疾病的药物，具有广泛的市场前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，是一种表达抗VEGF融合蛋白的AAV病毒载体及其应用。

背景技术

年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)是一种导致老年人严重视力减退甚至失明的眼病。AMD分为干性和湿性，分别以地图样萎缩(geographicatrophy,GA)和脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)为特征。

由于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是CNV生成的关键介质，阻断或中和VEGF表达的药物制剂，如贝伐单抗、雷珠单抗、阿柏西普及康柏西普等在近十年的临床治疗中成为主要选择。目前，抗VEGF治疗采用玻璃体腔内注射，存在并发眼内炎、葡萄膜炎、医源性玻璃体出血及视网膜色素上皮(retinal pigmentepithelium，RPE)撕裂等风险。由于抗VEGF药物半衰期短，为了维持功效，需要每4-8周进行重复的眼内注射。频繁注射带来的不便及高昂的价格使患者的依从性逐渐降低。由于VEGF不仅是内皮细胞特异性的，其在视网膜细胞中也广泛表达，对维持视网膜的结构和功能具有重要作用。长期的抗VEGF治疗可能会增加RPE萎缩、脉络膜萎缩及地图样萎缩(geographic atrophy，GA)的发生率。多中心临床研究发现：部分患者在抗VEGF治疗七年后，其视力降至基线甚至基线水平以下，甚至伴随着黄斑萎缩和纤维化的发生。因此在使用抗VEGF药物靶向抑制CNV的同时，需要注重保护光感受器和RPE功能。为了改善湿性AMD患者的治疗效果，必须开发出替代或补充治疗来降低视网膜的毒性反应。

因此，本领域迫切需要开发有效治疗黄斑变性等VEGF相关眼部疾病的方法和治疗药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种表达抗VEGF融合蛋白的AAV病毒载体及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种表达盒，所述表达盒从5’-3’端具有式I结构：

Z1-Z2-Z3-Z4(I)

式中，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；

Z1为启动子；

Z2为内含子；

Z3为编码抗VEGF融合蛋白的核苷酸序列；和

Z4为任选的hGHpA(human growth hormone poly(A)tail)序列。

其中，所述的抗VEGF融合蛋白包括VEGFR1的胞外第二结构域、VEGFR2的胞外第三结构域。

在另一优选例中，所述的抗VEGF融合蛋白还包括Fc片段，较佳地为人IgG1的Fc片段。

在另一优选例中，所述的抗VEGF融合蛋白还包括分泌信号肽，较佳地，所述的分泌信号肽来源于VEGFR1。

在另一优选例中，所述的抗VEGF融合蛋白还包括HA标记。

在另一优选例中，所述的启动子包括组织特异性启动子。

在另一优选例中，所述启动子为ubiquitin启动子。

在另一优选例中，所述内含子为uBc内含子。