[发明专利]一种发酵乳杆菌及其冻干粉的制备方法

权利要求书

1.一种发酵乳杆菌，其特征在于，所述的发酵乳杆菌命名为发酵乳杆菌(Lactobacillus

fermentum)HCS08-005，该菌株已于2018年08月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC No.16259。

2.一种发酵乳杆菌冻干粉，其特征在于，制备方法包括如下步骤：

1)冻存菌种复苏：取存于低温冰箱内的权利要求1所述的发酵乳杆菌菌种冻存管，立即放入37℃水浴锅内进行菌种复苏，15～30s，至冻存管内液体全部融化；

2)菌种活化：按照10％接种量，将复苏好的菌种直接接种至装有基础培养基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培养箱恒温静置培养17小时；

3)菌种扩培：按照5％接种量，将菌种活化结束的菌悬液接种至装有基础培养基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培养箱恒温静置培养8小时；

4)一级发酵：按照5％接种量，将菌种扩培结束的菌悬液接种至装有优化培养基的发酵罐中，开启搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，35℃恒温培养，发酵开始时，设定自动流加食品级NaOH以调控菌液pH值至5.20-5.40，发酵进行9h开始，每0.5h监控菌液OD值，当连续两次OD值之差＜0.2时，停止发酵；

5)二级发酵：按照6％接种量，将一级发酵结束的菌悬液接种至装有优化培养基的发酵罐中，开启搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，35℃恒温培养，在发酵开始时通过流加食品级NaOH溶液至pH为5.20-5.40，发酵进行6h开始，每0.5h监控菌液OD值，当连续两次OD值之差＜0.2时，发酵结束；

6)发酵液离心：二级发酵结束后，将发酵罐罐体温度调低，当罐内发酵液温度低于20℃时准备离心，离心设备采用管式离心机，离心前对转鼓进行蒸汽灭菌30min，转速为12000-14000rpm，结束进料后，空转5min；

7)离心结束后，收集菌泥；

8)冻干保护剂添加，按照菌泥：保护剂＝1:1-3的体积比，向菌泥中添加冻干保护剂，

并搅拌、混合均匀；

9)冷冻干燥：将混合均匀的菌粉，分装到冻干机托盘中，然后将冻干机托盘放入冻干机内进行菌粉的冻干，真空度0～1.0Pa，冷冻干燥机温度设置共13个区段，第1区段预冻2h，结束温度为-40℃；第2区段7h，结束温度为-25℃；第3区段3h，结束温度为-20℃；

第4区段3h，结束温度为-15℃；第5区段6h，结束温度为-10℃；第6区段6h，结束温度为-5℃；第7区段4h，结束温度为0℃；第8区段4h，结束温度为5℃；第9区段4h，结束温度为10℃；第10区段4h，结束温度为15℃；第11区段4h，结束温度为20℃；第12区段4h，结束温度为25℃；第13区段3.5h，结束温度为30℃；

10)冻干粉收集；

11)粉碎、包装：按质量要求进行粉碎后包装。

3.如权利要求2所述的发酵乳杆菌冻干粉，其特征在于，所述的基础培养基按照以下配方制成：葡萄糖25.0-35.0g/L、酵母蛋白胨20.0-25.0g/L、酵母浸出物3.0-8.0g/L、柠檬酸2.0-6.0g/L、余量为纯化水；按照配方比例称量、加热溶解，用1mol/L食品级NaOH溶液调培养基pH值至6.90-7.10，115℃下灭菌30min。

4.如权利要求3所述的发酵乳杆菌冻干粉，其特征在于，所述的基础培养基按照以下配方制成：葡萄糖30.0g/L、酵母蛋白胨22.0g/L、酵母浸出物6.0g/L、柠檬酸4.0g/L、余量为纯化水；按照配方比例称量、加热溶解，用1mol/L食品级NaOH溶液调培养基pH值至7.00，115℃下灭菌30min。

5.如权利要求2所述的发酵乳杆菌冻干粉，其特征在于：所述的优化培养基按照以下配方制成：酵母蛋白胨25.0-35.0g/L、葡萄糖20.0-30.0g/L、酵母浸出物5.0-15.0g/L、乳糖15.0-25.0g/L、结晶果糖2.0-8.0g/L、柠檬酸2.0-6.0g/L、L-苹果酸5.0g/L、余量为纯化水；按照配方比例称量、加热溶解，115℃下灭菌30min，用1mol/L食品级NaOH溶液调培养基pH值至6.00-6.50。