[发明专利]一种通过敲除rfaD基因高效合成PHB的方法

权利要求书

1.一种高效合成聚3-羟基丁酸酯的方法，其特征在于，敲除大肠杆菌基因组上ADP-L-甘油-D-甘露-庚糖-6-差向异构酶RfaD基因，并将β-酮基硫解酶、乙酰辅酶A还原酶和PHB合成酶的编码基因的基因簇phaCAB转化到大肠杆菌中得到重组菌后，利用重组菌进行发酵生产；

所述ADP-L-甘油-D-甘露-庚糖-6-差向异构酶RfaD的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述β-酮基硫解酶、乙酰辅酶A还原酶和PHB合成酶的编码基因的基因簇phaCAB核苷酸序列NCBI登录号为MH558939.1。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌W3110、大肠杆菌DH5α或大肠杆菌JM109。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转化是将基因连接到质粒pDXW-8上，然后转化到大肠杆菌细胞中。

4.根据权利要求1所述的方法，所述发酵生产是将所述的重组菌接种到发酵培养基中，以葡萄糖为底物，进行发酵生产。

5.根据权利要求4所述的方法，所述发酵培养基的组成为：20 g/L 葡萄糖，17.1 g/LNa₂HPO₄·12H₂O，3g/L KH₂PO₄，0.5 g/L NaCl，添加1 mM MgSO₄，0.1 mM CaCl₂，10 mg/mL 维生素B1。

6.根据权利要求4所述的方法，所述发酵生产是：将所述重组菌的种子液转接至发酵培养基，并加入卡那霉素和诱导剂IPTG后进行发酵。

7.权利要求1~6任一所述方法在生产聚3-羟基丁酸酯的应用。