[发明专利]基于PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法

说明书

本发明公开一种基于PCL‑PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法。主要是利用羧基和羟基的化学键连合成PCL‑PEG链状聚合物，再利用薄膜水化法的方法合成PCL‑PEG聚合物囊泡，囊泡中包封利用正电性PEI复合负电性质粒作为基因载体。之后在PCL‑PEG链状聚合物PEG一端修饰马来酰亚胺，同时使用巯基修饰的RGD肽，利用点击化学反应将RGD肽修饰在PCL‑PEG链状聚合物一端。形成基于聚合物囊泡的长循环可靶向性基因载体。

技术领域

本发明涉及材料及临床治疗领域，具体涉及一种基于PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法。

背景技术

随着人口老龄化扩大，老年疾病问题凸显，其中常见眼底病(如黄斑变性、眼底出血、糖尿病性视网膜病变等)是最为突出的老年疾病之一。在这些眼病发病过程中，“视网膜新生血管异常增多”是共同的病理特征，也是导致病情恶化的重要诱因。如何有效调控视网膜新生血管生成，已成为常见眼底病治疗的关键因素，是目前眼底疾病研究的热点和难点。

但是现有的对视网膜新生血管生成类疾病的治疗，往往采用玻璃体腔注射的给药手段，这类给药手段往往存在患者依从性低，频繁注射易引发其他眼部疾病等问题。鉴于目前存在的以上问题，亟待建立一种治疗策略，能够有效利用非侵入性的基因载体系统，从根本上阻断视网膜新生血管的异常发生和发展。

聚合物囊泡(Polymersome)是由具有两亲性质的聚合物分子自组装而成的封闭的有序双分子层结构。其结构类似于脂质体,由一个水溶性内腔和双层分子膜层构成。聚合物囊泡具有以下的优点：(1)聚合物囊泡的膜具有很高的稳定性；(2)聚合物囊泡的膜的性能(如厚度、弹性、韧性及降解性等)可进行大范围的调控；(3)组成聚合物囊泡的聚合物的选择性很大，因此聚合物囊泡的种类很多；(4)聚合物囊泡能够承载的药物种类多，可同时包裹亲水性药物和疏水性药物，也可以承载基因药物。

它具有脂质体和纳米粒等微粒载药系统的主要优点,而且其体内外稳定性显著优于脂质体；其水溶性的内腔结构对水溶性药物的包封量优于纳米粒；其膜层较厚,双分子层膜间有利于包封脂溶性药物。此外,通过两亲聚合物分子的选择(种类、分子量、嵌段比例、共聚物结构等),其构建的囊泡系统的理化特性(粒径、膜厚、渗透性、载药量等)乃至体内行为更具有主观的可控制性。近几年,由于大分子自组装的飞速发展,聚合物囊泡作为一类新型的药物载体,由于其特殊的稳定性、可设计性、结构和组成的多样性,已经吸引了越来越多研究者的积极关注,成为当前分子自组装新型药物载体研究的热点。

同时，可生物降解高分子材料由于其良好的生物相容性以及可生物降解性，在生物医学领域有着广泛的应用。PCL作为商品首先是由美国的联合碳化物公司推出，美国的Pitt和Schindler于70年代初提出用PCL作为药物控制释放的载体，并对其药物通透性和生物降解性进行了系统的研究。近30年的研究表明，PCL具有良好的组织相容性，PCL在生理环境中可水解降解，低分子量碎片可被巨噬细胞内吞并在细胞内降解。

PEG以其优良的理化特性，广泛地应用于药学和生物医学领域。PEG修饰后的药物与原型药物相比，具有提高药物溶解性，延长半衰期，血液浓度波动较小，减少免疫原性和抗原性，降低毒性等优势。紫杉醇等难溶性药物经PEG修饰后，溶解性和药效均可得到提升。在体内半衰期短的多肽蛋白类药物可通过PEG修饰的方式延长半衰期。

合成高分子可降解载体材料，可以被体内吸收，控释能力强，被国内外广泛应用。其特点在于无毒、成膜性好，化学稳定性高，工艺可控性强，批问质量差异小，是微囊泡制剂技术研究的重点。

因此，我们从化学合成学的角度出发，制备不同分子量配比的PCL-PEG链状嵌段聚合物，利用薄膜水化法制备PCL-PEG聚合物囊泡，同时复合对于视网膜新生血管病具有治疗作用的基因载体，采用尾静脉注射的方法对OIR(高氧诱导的视网膜病变)小鼠模型进行治疗。

发明内容