[发明专利]基于PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法

权利要求书

1.基于PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法，其特征在于：利用化学合成方法制备PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体；

具体步骤如下

1)PCL-PEG链状嵌段聚合物制备；

2)利用薄膜水化法制备PCL-PEG聚合物囊泡；

3)聚合物囊泡包封PEI复合的基因载体；

4)将PCL-PEG聚合物囊泡上修饰靶向肽。

2.根据权利要求1所述的基于PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法，其特征在于，所述步骤1)具体为：

(1)称取PEG-OH，PCL-COOH，EDC·HCL，DMAP，溶于溶剂二氯甲烷，置于圆底烧瓶；

(2)磁力搅拌后低温旋蒸除去溶剂以形成均匀的薄膜，吹干残余有机溶剂，干燥；

(3)加入二甲基亚砜，通过超声处理使壁上薄膜成为均匀乳液；

(4)使用3500D透析袋透析，并搅拌；

(5)每隔3h,5h换烧杯中的二甲基亚砜，过夜后，将烧杯中的二甲基亚砜换成双蒸水；

(6)隔3h换一次烧杯中的水；

(7)搅拌透析过夜，冻干。

3.根据权利要求1所述的基于PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法，其特征在于，所述步骤2)具体为：

(1)称取5mg聚合物于50ml圆底烧瓶中，加入2ml二氯甲烷溶解；

(2)减压旋蒸除去圆底烧瓶内的有机溶剂，至瓶上形成一层均匀薄膜；

(3)将烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂；

(4)往烧瓶中加入5mlddH₂O，60℃水浴中搅拌水化6h，可得1mg·ml^-1空白囊泡溶液。

4.根据权利要求1所述的基于PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法，其特征在于，所述步骤3)具体为：

(1)将质量比为(5-6):3的PCL-PEG双嵌段共聚物溶于有机溶剂中；

(2)减压旋蒸除去圆底烧瓶内的有机溶剂，至瓶上形成一层均匀薄膜，氮气吹干残余的有机溶剂；

(3)将圆底烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂；

(4)往烧瓶中加入5mlPEI复合的质粒溶液，60℃水浴中搅拌水化6h，再震荡混匀,冰浴下超声5min-35min形成稳定乳液，即可得1mg·ml^-1载基因药物的聚合物囊泡溶液。

5.根据权利要求1所述的基于PCL-PEG聚合物囊泡的长循环靶向基因载体的制备方法，其特征在于，所述步骤4)具体为：

(1)制备马来酰亚胺修饰的PCL-PEG-Mal链状聚合物，同时制备巯基(半胱氨酸)修饰的RGD肽(RGDC)；

(2)使用1:1当量比的PCL-PEG-Mal和RGDC溶于DMSO-d6，将混合物在室温下摇动，用¹HNMR监测反应，直至马来酰亚胺的次甲基质子峰消失；

(3)将反应混合物用H₂O稀释，置于透析膜中，并在4℃下使用蒸馏水进行4次透析；

(4)透析2天后，将透析的溶液冷冻干燥，即得到RGD靶向肽修饰的PCL-PEG链状聚合物。