[发明专利]用于检测儿茶酚-氧位-甲基转移酶基因多态性的探针、引物及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测儿茶酚‑氧位‑甲基转移酶多态性的探针，该探针的序列如SEQ ID NO.:1所示，或者在SEQ ID NO.:1的序列两端加以基团修饰。本发明还提供了一种用于检测儿茶酚‑氧位‑甲基转移酶基因多态性的引物，该引物的序列如SEQ ID NO.:2(引物1)和SEQ ID NO.:3(引物2)所示。本发明的用于检测儿茶酚‑氧位‑甲基转移酶基因多态性的探针和引物，在检测儿茶酚‑氧位‑甲基转移酶基因多态性时，具有灵敏度高、特异性好、快速、高通量检测等优点。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说涉及用于检测儿茶酚-氧位-甲基转移酶基因多态性的探针、引物及试剂盒。

背景技术

COMT基因编码的儿茶酚-氧位-甲基转移酶是儿茶酚胺的主要降解酶，儿茶酚胺在交感神经节细胞与效应器之间的信号传导中起到重要作用。该基因最常见的多态性为Val158Met，分子生物学研究表明，COMT基因的第158号氨基酸由Val转化为Met，编码的儿茶酚-氧位-甲基转移酶的活性将低了大约3～4倍。

COMT基因与儿童的阅读理解能力、语言表达能力、专注力、逻辑思维能力、音乐能力、舞蹈天赋等特质具有显著相关性，其多态性可以对儿童的天赋能力进行评估。一旦该基因缺陷，容易引起儿茶酚激素及肾上腺素、去肾上腺素和多巴胺等神经递质系统功能运转异常，增加抑郁症、精神分裂症等心智障碍相关疾病的发生风险；该基因缺陷还容易导致机体脂肪代谢的雌激素通路紊乱，脂肪积累过多而使中枢神经型肥胖的发生风险增高。因此针对COMT基因多态性检测可用于儿童天赋能力的评估，临床辅助心智障碍相关疾病的诊断，检测结果可指导进行个性化体重管理。

目前普遍应用的突变检测方法为DNA直接测序法，PCR产物直接进行DNA序列分析，可以明确突变位点，但存在费时费力，成本较昂贵，不适用于对大量样本进行检测等缺点。因此，需要开发一种适合大批量样本检测的方法。

发明内容

本发明的目的首先在于提供一种用于检测儿茶酚-氧位-甲基转移酶基因多态性的探针，该探针的序列如SEQ ID NO.:1所示，或者在SEQ ID NO.:1的序列两端加以基团修饰；

其中修饰基团为：5′的修饰基团为荧光基团，如FAM；3′的修饰基团为淬灭基团，如BHQ1；

具体的说，本发明提供的用于检测儿茶酚-氧位-甲基转移酶基因多态性的探针为：5′-FAM-CGCTGGCNTGAAGGACAAGGTGTGCAGCG-BHQ1-3′；

其中N为变异碱基，具体为GA；

所述的探针包括环序列和茎序列，其中环序列为第6-24bp(5′-GCNTGAAGGACAAGGTGTG-3′)，其两侧是两个反向互补的茎序列，茎序列为(5′-FAM-CGCTG……CAGCG-BHQ1-3′)。

该探针的设计原理为：根据COMT基因多态性rs4680，设计探针和引物，需要保证在退火温度下DNA模板不存在时，探针呈茎环状态。探针所采用的淬灭基团为BHQ1，其淬灭空间范围很小，搭配短发射波长的荧光基团，如FAM，只有当分子信标呈茎环结构时，荧光才会被很好地淬灭。环序列与靶DNA序列互补时，确定最佳PCR引物为40-45bp大小，PCR产物长度100-180bp。

本发明还提供了一种用于检测儿茶酚-氧位-甲基转移酶基因多态性的引物，该引物的序列如SEQ ID NO.:2(引物1)和SEQ ID NO.:3(引物2)所示：

引物1 5′-AGGTGACACTATAGAATACATCACCATCGAGATCAACC-3′

引物2 5′-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACTGGTGGGGAGGACAAAGT-3′。