[发明专利]一种注射用4-脱甲氧柔红霉素有关物质的分析方法

说明书

本发明涉及一种注射用4‑脱甲氧柔红霉素有关物质的分析方法，采用本发明的方法可以实现注射用化合物L中各杂质的完全分离，且主成分与各杂质的分离度均大于1.5，各杂质间的分离度均大于1.5，理论板数按主成分计不低于2000。杂质的检测灵敏度非常高，利用本发明的方法可以快速准确地、以高灵敏度进行化合物L有关物质的定量分析，从而保证本品的质量可控性。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种注射用4-脱甲氧柔红霉素有关物质的高效液相色谱分析方法。

背景技术

蒽环类化合物是一类广泛应用于治疗血液系统恶性肿瘤和实体肿瘤的物质，其中(7S,9S)-9-乙酰基-7,8,9,10-四氢-6,7,9,11-四羟-7-O-(2,3,6-三脱氧-3-氨基-α-L-来苏-已-吡喃糖)-5,12-骈四苯盐酸盐，即4-脱甲氧柔红霉素(下文称为化合物L)，是治疗复发性和难治性的成人急性髓细胞白血病(AML)的一线用药，由法玛西亚普强公司开发生产，1990年09月27日经FDA批准上市，2004年由CFDA批准上市。相较于盐酸柔红霉素，化合物L具有毒副作用更小、疗效更好、耐药性更低等优点。

在化合物L合成及储存过程中会产生A、B、C、D、E五个杂质(结构见下表)，其中杂质A既是合成过程中的工艺产物又是酸降解和高温降解的主要产物，杂质B为化合物L与辅料乳糖相互作用产生的降解杂质，C是碱降解的主要产物，杂质D和杂质E为合成过程中主要的工艺杂质。因此，对这五个有关物质的定量控制具有重要意义。

美国药典公开了以水-乙腈-甲醇-磷酸(540:290:170:2)(每1000ml中含1g十二烷基硫酸钠，并用2N氢氧化钠调节pH至3.6±0.1)为流动相，用高效液相色谱法测定化合物L中含量及有关物质的方法。

日本药典公开了以缓冲液(10.2g磷酸二氢钾溶解于750ml水中，加入1ml磷酸)-四氢呋喃(750:250)(每500ml中含0.72g十二烷基硫酸钠，0.5mlN,N-二甲基正辛胺，并用2N氢氧化钠调节pH至4.0)为流动相，用高效液相色谱法测定化合物L含量及有关物质的方法。

国家药典委员会征求意见稿公开了以0.1％磷酸溶液-甲醇(57:43)为流动相用高效液相色谱法测定注射用化合物L含量及有关物质的方法。

但上述分析方法均无法有效同时分离化合物L供试品中存在的杂质A-E，因此，开发一种能够同时分离测定化合物L及其杂质的方法对于控制注射用化合物L的质量，提高药品疗效、降低毒副作用是非常必要的。

发明内容

一方面，本发明提供了一种注射用化合物L有关物质的分析方法，其特征在于：所述方法是高效液相色谱法，该方法采用反相色谱柱，流动相A选自磷酸水溶液，流动相B选自甲醇和乙腈的混合溶液，按照等度或梯度洗脱。

在一些实施方案中，所述磷酸水溶液的浓度为0.05～0.5％；在一些典型的实施方案中，所述磷酸缓冲液的浓度为0.05～0.2％；在一些更为典型的实施方案中，所述磷酸缓冲液的浓度为0.09～0.11％；在一些最为典型的实施方案中，所述磷酸缓冲液的浓度为0.1％。

在一些实施方案中，所述甲醇和乙腈的混合溶液，其中甲醇与乙腈的体积比25～75：25～75；在一些典型的实施方案中，甲醇与乙腈的体积比为45～55：45～55；在一些更为典型的实施方案中，甲醇与乙腈的体积比为50：50。

在一些实施方案中，所述流动相A与流动相B的体积比为10～80：20～90，按照等度或梯度洗脱；在一些典型的实施方案中，所述流动相A与流动相B的体积比为15～70：30～85，按照等度或梯度洗脱；在一些更为典型的实施方案中，所述流动相A与流动相B按照下表梯度洗脱：