[发明专利]抑制RKIP基因表达的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了抑制RKIP基因表达的siRNA，其为双链RNA，其序列为：正义链5'GCUGCAUAGUUAUCAAUAUTT3'，反义链5'AUAUUGAUAACUAUGCAGCTT3'。本发明通过生物学方法挖掘一种能够抑制RKIP基因表达的小干扰RNA，其能够显著抑制微波辐射所致大鼠空间认知能力下降、海马组织形态结构改变，本发明为小干扰siRNA的临床应用提供了重要的理论基础，也为防治药物研发提供了新思路。

技术领域

本发明涉及分子生物学和基因工程技术领域。更具体地说，本发明涉及一种抑制RKIP基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

研究表明，脑是微波辐射损伤的重要敏感靶器官。流行病学调查显示，长期低剂量微波辐射引起受辐射人员脑电图异常、脑功能紊乱，重者可出现行为异常、神经衰弱、失眠多梦、记忆力减退等。另有报道指出，微波辐射可能增加老年痴呆的发病风险。动物实验研究表明，微波辐射导致动物空间参考记忆、短时记忆、长时记忆及运动性学习记忆能力下降，且伴有焦虑、兴奋等行为异常。进一步研究发现，微波辐射可引起海马脑区组织病理学改变。研究证实，海马是参与学习记忆功能的关键脑区，它不仅是长时程陈述性记忆形成的决定性结构，还参与短时记忆和空间记忆的形成，同时也参与情感行为的调节。上述研究提示，微波辐射可导致海马脑区认知功能障碍。

Raf激酶抑制蛋白(Raf-1kinase inhibition protein,RKIP)属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族，是高度保守的多功能调节性蛋白质，广泛存在于原核和真核生物中，在同一物种的多种组织和不同细胞类型中均有表达。近年来，RKIP的生物学功能研究日益受到瞩目。作为信号转导中的枢纽蛋白，RKIP主要参与调控ERK、NF-кB和GPCR信号通路，并介导它们之间的相互对话，可引起多种细胞行为，包括细胞凋亡、神经发育、精子发生、细胞迁移、有丝分裂等。RKIP表达失调会导致阿尔茨海默病、肿瘤转移、染色体异常等病理过程。此外，RKIP是海马胆碱能神经刺激肽的前体蛋白，可促进乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)合成。众所周知，ACh是参与学习和记忆功能的重要神经递质。我们前期研究发现，微波辐射后大鼠海马RKIP表达失调，并且与微波辐射所致海马认知功能障碍密切相关。

基于上述可知RKIP在微波辐射脑损伤中发挥重要调节作用，由于目前微波辐射脑损伤机制尚未完全阐明，有关微波辐射脑损伤的防治仍以防护服等物理防护措施为主，尚缺乏特异有效的防治靶点和药物。因此，RKIP可能为微波辐射脑损伤的防治提供了一个有效靶点，从而为防治药物研发提供了新思路。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种抑制RKIP基因表达的siRNA及其应用，其通过生物学方法挖掘一种能够抑制RKIP基因表达的小干扰RNA，其能够显著抑制微波辐射所致大鼠空间认知能力下降、海马组织形态结构改变，本发明为小干扰siRNA的临床应用提供了重要的理论基础，也为防治药物研发提供了新思路。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种抑制RKIP基因表达的siRNA，所述siRNA为双链RNA，所述siRNA的序列为：

正义链5'GCUGCAUAGUUAUCAAUAUTT3'，

反义链5'AUAUUGAUAACUAUGCAGCTT3'。

优选的是，所述的抑制RKIP基因表达的siRNA，所述siRNA的序列的正义链和反义链的5'末端荧光标记修饰。

优选的是，所述的抑制RKIP基因表达的siRNA，所述siRNA的序列的正义链和反义链的3'末端胆固醇修饰。

优选的是，所述的抑制RKIP基因表达的siRNA，所述siRNA的序列的正义链经全程2’-OMe修饰。