[发明专利]一种分离和体外培养人胰腺癌组织类器官的方法

说明书

本发明公开了一种分离和体外培养人胰腺癌组织类器官的方法。该方法包括如下步骤：(1)将人胰腺癌组织剪切后进行酶消化，得到胰腺癌单细胞；其中，酶消化的条件为：37℃，30～40rpm消化10～20min，重复消化3次；(2)将胰腺癌单细胞与基质胶混合均匀后，再加入含有生长因子PGE2和胃泌素Gastrin I的培养基进行培养，得到人胰腺癌组织类器官。本发明中采用短时、多次消化的方法对肿瘤组织进行消化，可有效提高细胞的得率和细胞活性；本发明中采用含有生长因子PGE2和胃泌素Gastrin I的培养基进行培养，能有效促进胰腺癌类器官的生长，以及提高胰腺癌类器官的存活率。

技术领域

本发明涉及肿瘤生物学领域，特别涉及一种分离和体外培养人胰腺癌组织类器官的方法。

背景技术

在过去的几十年间我们对原发性肿瘤有了更加广泛和深入的认识。尽管部分肿瘤的治疗方式有了实质性的发展，但肿瘤治疗依然是世界性的健康问题。开发新的、靶向性的治疗方法为解决这一问题提供了机会。其中，如何将基础研究成果转化为临床治疗方案是开发新治疗方案的主要瓶颈。主要原因是基础研究中使用的肿瘤模型很难反映病人肿瘤的真实情况。所以许多药物虽然在基础研究中的肿瘤模型中有不错的治疗效果，但是在临床试验中都失败了。尽管动物肿瘤模型可以为肿瘤转化研究提供重要指导意见，但是动物肿瘤模型构建需要花费大量时间，并且无法反映肿瘤的病理复杂性和遗传异质性。

最常见的人肿瘤模型包括肿瘤细胞系和病人来源的肿瘤异种移植物(PDTXs)。来源于病人组织的细胞系广泛应用于肿瘤研究中。但是，细胞系有很多弊端。例如从肿瘤中建立细胞系非常低效，细胞系需要经历额外的突变并且需要在2D体外环境中进行筛选。由于只有极少数的细胞克隆可以扩增并且进行无限传代，这些细胞克隆经历了大量的遗传改变无法反映肿瘤的遗传异质性。并且通常都缺少正常组织来源的细胞系作为对照，同时细胞系的体外培养也缺少肿瘤微环境中的间质成分。PDTXs的优势在于可以比较好的模拟肿瘤的生物学特点。将新鲜组织在免疫缺陷小鼠的皮下或者原位进行直接移植是构建PDTXs最常见的手段。然而，极低的移植成功率和昂贵的价格让PDTXs的构建变得很比较困难。更重要的是PDTXs在小鼠体内可能会经历小鼠特异性的肿瘤进化。

近期发展起来的3D培养技术为体外构建更多的病理和生理组织提供了基础。将组织来源的成体干细胞包裹在基质胶中进行体外3D培养，这些干细胞可快速生长并且形成有序的器官结构，称之为类器官(organoid)。类器官可以进行长期扩增传代和保存，并且可以进行遗传修饰，同时保持遗传和表型的稳定性，为基础研究向临床转化提供更加可靠的平台。然而，如何从人肿瘤组织中分离成体干细胞，并且在体外3D环境中培养出类器官依然是亟待解决的难题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种分离和体外培养人胰腺癌组织类器官的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种分离和体外培养人胰腺癌组织类器官的方法，包括如下步骤：

(1)将人胰腺癌组织剪切后进行酶消化，得到胰腺癌单细胞；其中，酶消化的条件为：37℃，30～40rpm消化10～20min，重复消化3次；

(2)将步骤(1)中得到的胰腺癌单细胞与基质胶混合均匀(形成3D培养微环境)后，再加入含有生长因子PGE2和胃泌素Gastrin I的培养基进行培养，得到人胰腺癌组织类器官。

步骤(1)中所述的剪切为将人胰腺癌组织剪成≤1mm³的组织块。