[发明专利]重组质粒、重组工程菌及其应用

说明书

本发明提供一种能够使细胞因子更好发挥效应的重组质粒、重组工程菌及其应用。该重组质粒包括相互连接的细胞因子的基因、增强子样序列和穿膜肽的基因，增强子样序列为SEQ ID No：1‑4中的至少一种。本发明将增强子样序列与穿膜肽的编码基因相互连接，形成新的增强子样序列，与外源基因结合后，形成的重组质粒能够明显改善外源基因的转录速率和表达产物的产率，促进靶细胞的摄取率，从而增强表达产物的功效，使外源的细胞因子能够更好地发挥效应。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种重组质粒、重组工程菌及其应用。

背景技术

干扰素(interferon，INF)是机体受到特定刺激时产生的一种细胞因子。依据其基因序列、染色体定位和受体特异性的区别，干扰素可以分为3型：即Ⅰ型(包括IFN-α、IFN-β、IFN-δ等)、Ⅱ型(即IFN-γ)和Ⅲ型干扰素(包括IFN-λ1、IFN-λ2及IFN-λ3)。干扰素的生物学作用主要表现在抗病毒、抗肿瘤及免疫调节三个方面。其中最主要的方面是抗病毒作用，其具有广谱抗病毒活性，但缺乏特异性。机体感染病毒后，可在瞬间产生较多的干扰素，随后干扰素逐渐扩散至全身，激活细胞内的抗病毒作用机制，产生一系列抗病毒物质，起到抗病毒的作用。同时，干扰素还具有抗肿瘤的作用，干扰素可以抑制肿瘤的增殖，改变肿瘤细胞的表面性能，诱发新的抗原，从而被免疫监视细胞识别并加以排斥。另外，干扰素还可以通过免疫调节作用，增强机体抗肿瘤免疫力。同时，可与抗病毒作用同时存在。例如，Ⅱ型干扰素的主要功能就是参与免疫调节。干扰素在临床上得到了十分广泛的应用，在抗肿瘤、抗病毒等方面给患者带来了福音，但其作为具有良好生物活性的细胞因子怎样才能更好地发挥效应还需要进一步探索。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题在于如何提供一种能够使细胞因子更好发挥效应的重组质粒、重组工程菌及其应用。

根据本发明的第一个方面，本发明提供了一种重组质粒，根据本发明的实施例，该重组质粒包括相互连接的增强子样序列、穿膜肽的编码基因和细胞因子的编码基因，增强子样序列为SEQ ID No：1-4中的至少一种。

其中，该重组质粒还包括插入上述基因片段的质粒载体，该质粒载体可以选用本领域常用的一些质粒载体，其非限制性实例包括PV20、PB20等。

根据本发明的实施例，该重组质粒至少具有以下有益效果：

本发明将增强子样序列与穿膜肽的编码基因相互连接，形成新的增强子样序列，与外源基因结合后，形成的重组质粒能够明显改善外源基因的转录速率和表达产物的产率，促进靶细胞的摄取率，从而增强表达产物的功效，使外源的细胞因子能够更好地发挥效应。

另外，根据本发明的实施例，该重组质粒还可以具有如下的附加技术特征：

在本发明的一些实施例中，穿膜肽具有如SEQ ID No：5所示的氨基酸序列，该氨基酸序列为Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg，即RKKRRQRRR(SEQ ID No：5)。

在本发明的一些实施例中，穿膜肽的编码基因具有如SEQ ID No：6所示的核苷酸序列，该核苷酸序列为CGTAAGAAGCGTCGACAACGCCGACGT(SEQ ID No：6)。

在本发明的一些实施例中，细胞因子为干扰素、表皮细胞生长因子中的至少一种。

在本发明的一些实施例中，干扰素为人源干扰素。

在本发明的一些实施例中，人源干扰素为以下的至少一种：IFN-α、INF-β、INF-α2a、INF-γ。

根据本发明的第二个方面，本发明提供了一种重组工程菌，根据本发明的实施例，该重组工程菌转化有上述的重组质粒。该重组工程菌可以是本领域常见的工程菌，其非限制性实例包括大肠杆菌、酵母菌等。