[发明专利]植物作为宿主在表达M7842中的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及植物作为宿主在表达M7842的应用。本发明利用植物例如生菜作为重组蛋白质生产的有效表达平台，利用简单以及有效的农杆菌介导真空渗透方法来表达M7842。该表达体系确定植物外源蛋白在农杆菌侵染4天后就可以收集。利用Western Blot蛋白杂交法确定M7842成功表达，用AKTA蛋白纯化系统成功纯化出M7842。活性测试结果表明M7842在小鼠模型上抑制肿瘤生长效果显著。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及植物作为宿主在表达M7842中的应用。

背景技术

目前，癌症已成为我国居民的首要死因。自从19世纪50年代以来，医生就一直在试验所谓的癌症免疫疗法。因为德国医生发现如果肿瘤受到感染并激发病人的免疫反应之后，它有时会变小。现在，在约160年之后，激发身体天然屏障以对抗癌症的理念终于迎来了自己的辉煌时刻。以默克公司和美国百时美施贵宝公司为首的制药企业开发出了一系列治疗手段，旨在去除癌症细胞用于躲开免疫系统的屏障。通过向肿瘤释放身体对抗疾病的T细胞，这些药品显示出能大大延长某些黑素瘤晚期病人生命的潜能。近年来，免疫疗法已经在癌症治疗上取得不小的成功，其中最有代表性的就是靶向PD-1/PD-L1通路的免疫检查点抑制剂。

M7824是一种新型的双功能融合蛋白，该蛋白由靶向PD-L1蛋白的IgG1单克隆抗体和人类转化生长因子-β(TGF-β)受体II型融合而成。简单来说，这种双功能蛋白既能抑制PD-L1蛋白配体，又能抑制TGF-β通路，双管齐下，能促进免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤。并且，同时靶向这两个系统或可克服肿瘤细胞对PD-1/PD-L1疗法的抗药性。这样就会极大地提升药物的有效率，并降低联合用药的副作用。但目前的表达系统耗时长，纯化工艺复杂，存在基因污染，感染人体的潜在病虫害等问题，且生产成本较高，存在产品安全性的隐患。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了植物作为宿主在表达M7842双功能融合蛋白中的应用。本发明利用植物尤其是生菜作为重组蛋白生产的高效平台技术，表达了M7842。并且在温和的条件下成功分离出有活性的外源蛋白，证明植物尤其是生菜表达平台可以成功用来生产M7842蛋白。时间短(4d)，纯化简单，生产便捷。消除基因污染，消除感染人体的潜在病虫害等。大大降低生产成本，提高产品安全性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了植物作为宿主在表达M7842中的应用；所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物。

植物瞬时表达技术是在植物生长到一定阶段，利用多种不同的技术方式将含有目标蛋白的质粒转移到植物细胞中，在植物细胞中建立高效、可控的表达系统，获得该基因短暂的可控表达的技术。与稳定表达相比，瞬时表达所需时间短，不需要将外源基因整合到宿主植物染色体中，仅需几天的时间就可拿到实验结果。与细菌表达系统相比，植物表达系统可以对所表达的蛋白进行正确的折叠、加工、修饰，所生产的蛋白活性高于细菌表达系统；与动物细胞表达系统相比，植物表达系统的成本非常低，仅为其千分之一到千分之二。

在上述研究的基础上，本发明还提供了一种表达载体，包括M7842的重链序列或轻链序列以及载体。

在本发明的一些具体实施方案中，所述M7842的重链序列或轻链序列为将M7842的重链、M7842的轻链的密码子优化为植物偏好的密码子，获得的优化M7842的重链序列或优化的M7842轻链序列。

在本发明的一些具体实施方案中，所述优化的M7842的重链的核苷酸序列如SEQID No.1所示；所述优化的M7842的重链的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述优化的M7842的轻链的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述优化的M7842的轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。