[发明专利]一种病毒核酸联合快速检测方法

说明书

本发明公开了一种病毒核酸联合快速检测方法，适用于检测样品是否为甲型流感病毒H7N9亚型，具体包括如下步骤：S1、将磁珠和裂解液混合配置形成磁珠裂解液；S2、得到病毒核酸的吸附物；S3、合成重组酶聚合酶扩增反应所需要的上游引物和下游引物；S4、形成反应体系；S5、将步骤S4中的反应体系密封放置于加热容器内，进行加热反应，形成反应产物；S6、在所述步骤S5中的反应产物中加入含有颜色的核酸电泳缓冲液，进行琼脂糖核酸凝胶电泳，若出现210bp的核酸电泳条带，则判断所述的样品为甲型流感病毒H7N9亚型。采用本发明的方法对甲型流感病毒H7N9亚型进行检测，检测操作流程较少，检测耗费时间较短，有利于提高检测效率，降低检测成本。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体是一种病毒核酸联合快速检测方法。

背景技术

甲型流感病毒为常见流感病毒，甲型流感病毒最容易发生变异，甲型流感病毒的亚型则被人们称为“禽流感”，禽流感(Bird Flu)是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，病毒基因变异后能够感染人类，感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡，病死率很高。此病可通过消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等多种途径传播，人员和车辆往来是传播本病的重要因素。

其中，甲型流感病毒H7N9亚型(Influenza A virus subtype H7N9，记作A(H7N9)或H7N9)是一种甲型流感病毒，是禽流感病毒或禽流感病毒的一个亚型。但其传播会致人死亡，情况特殊，有基因突变的风险。

现有甲型流感病毒H7N9亚型的各种核酸检测方法大多，耗费时间都比较长，检测效率较低，检测成本较高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种病毒核酸联合快速检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种病毒核酸联合快速检测方法，适用于检测样品是否为甲型流感病毒H7N9亚型，具体包括如下步骤：

S1、将磁珠和裂解液混合配置形成磁珠裂解液；

S2、在高温条件下，添加所述的样品于所述步骤S1中的磁珠裂解液中，所述的样品在所述的磁珠裂解液中高温热裂解出病毒核酸，然后冷却至室温，使得磁珠裂解液中的磁珠吸附所述的病毒核酸，形成吸附物，通过磁力吸附所述的吸附物，去除磁珠裂解液的上清液；

S3、按照指定核酸序列，合成重组酶聚合酶扩增反应所需要的上游引物和下游引物；

S4、在聚合酶链式反应管中依次加入纯净水、反应缓冲液、所述步骤S3中的上游引物、所述步骤S3中的下游引物、酶混合物、RNA酶抑制剂、所述步骤S2中的吸附物以及醋酸镁，形成反应体系；

S5、将步骤S4中的反应体系密封放置于加热容器内，进行加热反应，反应温度为42-45℃，反应时间为15min，形成反应产物；

S6、在所述步骤S5中的反应产物中加入含有颜色的核酸电泳缓冲液，进行琼脂糖核酸凝胶电泳，若出现210bp的核酸电泳条带，则判断所述的样品为甲型流感病毒H7N9亚型，否则判断为非甲型流感病毒H7N9亚型。

作为本发明进一步的方案：所述裂解液为氯化钠、氯化钾以及二氯化镁的混合液。

作为本发明进一步的方案：所述步骤S2中的高温条件为100-110℃。

作为本发明进一步的方案：所述步骤S3中的指定核酸序列采用SEQ ID NO.1和SEQID NO.2。

作为本发明进一步的方案：所述步骤S4中的反应缓冲液采用DATP核苷酸、DGTP核苷酸、DTTP核苷酸和DCTP核苷酸的混合液。