[发明专利]一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法

说明书

本发明涉及一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因后并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，再在此基础猪的Rosa26位点再定点插入hCD39、hTBM两个心脏功能修饰特异基因，构建出多基因修饰的心脏异种器官移植供体猪再进行功能验证，获得适合心脏异种移植的供体猪。本发明为异种心脏移植提供了可靠的供体猪，为处于终末期的心脏病患者的治疗提供了希望。

技术领域

本发明属于动物生物技术领域，具体地说，涉及一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法。

背景技术

器官移植是治疗终末期器官衰竭患者的唯一途径，而异种心脏移植是解决人类心脏供体严重短缺的最有效的途径。近年来，随着我国心血管疾病等慢性疾病患者的大幅增长，使得发展成为终末期心脏衰竭的病人正在急剧增加，对器官需求的压力也将逐渐加大。据不完全统计，我国目前每年可以实施临床器官移植的数量约为1万例，而等待器官移植的病人则有150万，等待器官移植与可进行器官移植患者的数量比值已达150:1。而且，从2015年起，我国已经全面停止使用死囚器官作为移植供体来源，只能将人类去世后自愿捐献的器官作为我国器官移植使用的最终来源，这势必导致心脏等器官供体本已日益短缺的形势更加严峻，这对于全国等待供体的庞大患者群体来说，死者捐献的器官已严重不能满足需求。因此，寻找新的心脏等器官移植供体来解决目前心脏供体严重短缺的难题刻不容缓。

谈到心脏异种器官移植，因猪易于饲养繁殖，心脏尺寸与人类相匹配，且生理和代谢方面与人类极为相近，人猪共患病发生的可能性较小，涉及伦理道德争议少，并可通过人为的基因修饰来增强供体器官的匹配性。因此，猪被公认是最适合用作心脏异种移植供体的物种。经过科学家们近半个多世纪的努力和探索，目前已筛选到近30个能有效缓解免疫学不相容性和克服功能性障碍的相关修饰基因，多种基因修饰的供体猪也被开发并进行了猪到非人灵长类的异种移植试验。