[发明专利]二维柱切换高效液相色谱法测定维生素D含量的方法

说明书

本发明公开了一种二维柱切换高效液相色谱法测定维生素D含量的方法，其采用二次切换的正相色谱进行检测，可实现样品中前维生素D和维生素D的同时测定，且待测样品用正己烷溶解后可直接进行测定，避免了复杂的样品前处理步骤，其适用于植物油制剂中微量维生素D的准确检测。

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种二维柱切换高效液相色谱法测定维生素D含量的方法。

背景技术

经查阅国内外五大药典，维生素D测定法只在CHP2015年版和USP41中有收载。而除了药典中收载的维生素D的含量测定方法，食品中也收载了两个测定方法。但比较现阶段的各个维生素D含量测定方法发现，在测定样品中微量维生素D含量的时候，均需要不同程度的前处理。特别是药品植物油制剂中维生素D的含量测定（即现行CHP2015年版中0722 维生素D测定法），整个实验过程繁琐复杂，需多次转移复溶，并且都是使用极少量的溶剂，这导致测定结果的准确性和重现性把握难度较大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用二维柱切换高效液相色谱法测定植物油制剂中微量维生素D含量的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种二维柱切换高效液相色谱法测定维生素D含量的方法，其包括如下步骤：

1）对照品溶液的配制：在避光条件下，取维生素D₃对照品约25mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加入异辛烷80ml，超声处理（避免加热）1分钟使其完全溶解，然后用异辛烷稀释至刻度，摇匀，充氮密塞，0℃以下保存，作为对照品贮备溶液；精密量取对照品贮备溶液5ml，置50ml量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml棕色量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为校正因子f₁对照品溶液；另精密量取对照品贮备溶液5ml，置50ml量瓶中，加2,6-二叔丁基对甲酚结晶1粒，通氮排除空气后，密塞，置90℃水浴中加热1.5小时，取出，迅速冷却，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为校正因子f₂对照品溶液A；精密量取校正因子f₂对照品溶液A 2ml，置100ml棕色量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为校正因子f₂对照品溶液B；

2）样品溶液的配制：精密称取供试样品适量，置25ml棕色量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；

3）色谱检测：采用二维柱切换高效液相色谱法分别对校正因子f₁对照品溶液、校正因子f₂对照品溶液B及样品溶液进行检测；

4）计算：依据色谱检测结果，先按式a和b分别计算获得校正因子f₁和校正因子f₂，再利用所得样品溶液的前维生素D和维生素D峰面积，按式c计算样品中维生素D及前维生素D的总含量c_i；

f₁=c₁/A₁ 式a，

式中，c₁为校正因子f₁对照品溶液的浓度，μg/ml；A₁为校正因子f₁对照品溶液色谱图中维生素D的峰面积；

f₂=(c₁-f₁A₁`)/A₂ 式b，

式中，c₁为校正因子f₁对照品溶液的浓度，μg/ml；f₁为维生素D的校正因子；A₁`为校正因子f₂对照品溶液色谱图中维生素D峰的峰面积；A₂为校正因子f₂对照品溶液色谱图中前维生素D峰的峰面积；