[发明专利]检测试剂盒的应用

说明书

本发明提供一种检测试剂盒在检测乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药和转移风险中的应用，所述检测试剂盒通过实时荧光定量PCR检测受试体内的高风险miRNA水平来评估乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药和转移风险，依托于miRNA的检测，是一种相对便捷的方式，在兼顾了准确率的同时考虑到操作的可行性；且通过将高危miRNA对比正常人体内水平进行分级以便评估耐药与转移风险的方法，制定了基于临床前瞻性的预测性程序，兼顾了检测的稳定性和均一性。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体地，涉及一种检测试剂盒在检测乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药和转移风险中的应用。

背景技术

乳腺癌是女性中最为常见的恶性肿瘤之一，全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。由于乳腺癌是一种异质性肿瘤，其组织形态和治疗反映上都存在着巨大差异，因此针对不同形态的乳腺癌需要采取不同的治疗方案。

因为乳腺癌对化疗相对敏感，故化疗仍然是乳腺癌的治疗的重要途径。但由于乳腺癌的异质性，在化疗过程中癌细胞易产生耐药并发生转移，从而危及患者生命。因此，如何检测一些指标来衡量和预估患者化疗过程中的有效程度已称为亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种检测试剂盒在检测乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药和转移风险中的应用。

根据本发明，所述检测试剂盒通过实时荧光定量PCR检测受试体内的高风险miRNA水平来评估乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药和转移风险。

根据本发明，所述高风险miRNA包括以下中的一种或多种：miR-130b、miR-29a、miR-132、miR-212、miR-93、miR-222、miR-21、miR-221及miR-29a。

根据本发明，将所述高风险miRNA分为A、B与C级，其中，A级包括：miR-132、miR-212、miR-222，B级包括miR-130b、miR-93、miR-21，C级包括miR-221、mi-R21、miR-29a。

根据本发明，所述用于检测乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药风险包括：

通过针对受试体的肿瘤组织进行实时荧光定量PCR检测，得到第一PCR检测结果；

根据预设高危miRNA分级标准对所述所述第一PCR检测结果进行评估，得到耐药评分。

根据本发明，所述通过针对受试体的肿瘤组织进行实时荧光定量PCR检测，得到第一PCR检测结果的步骤包括：

对提取的肿瘤组织进行称重，并在加入TRizol试剂混匀处理后，得到第一混合溶液，将所述第一混合溶液进行裂解；

在所述第一混合溶液中加入氯仿，混匀处理后，得到第二混合溶液，将所述第二混合溶液静置；

对静置处理后的所述第二混合溶液进行离心；

获取离心后的所述第二混合溶液的上清液，并向所述第二混合溶液的上清液中加入预冷异丙醇，混匀处理后，得到第三混合溶液；

对所述第三混合溶液进行离心；

在舍弃所述第三混合溶液的上清液后的剩余溶液中，加入乙醇洗涤沉淀后进行离心；

舍弃离心后的上清液，并蒸发剩余溶液中的乙醇；

加入RNase-free water溶解RNA；

测定总RNA浓度，并取RNA逆转录得到的cDNA后进行扩增。