[发明专利]检测试剂盒的应用

权利要求书

1.检测试剂盒在检测乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药和转移风险中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒通过实时荧光定量PCR检测受试体内的高风险miRNA水平来评估乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药和转移风险。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述高风险miRNA包括以下中的一种或多种：miR-130b、miR-29a、miR-132、miR-212、miR-93、miR-222、miR-21、miR-221及miR-29a。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，将所述高风险miRNA分为A、B与C级，其中，A级包括：miR-132、miR-212、miR-222，B级包括miR-130b、miR-93、miR-21，C级包括miR-221、miR-21、miR-29a。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于检测乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有耐药风险包括：

通过针对受试体的肿瘤组织进行实时荧光定量PCR检测，得到第一PCR检测结果；

根据预设高危miRNA分级标准对所述第一PCR检测结果进行评估，得到耐药评分。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述通过针对受试体的肿瘤组织进行实时荧光定量PCR检测，得到第一PCR检测结果的步骤包括：

对提取的肿瘤组织进行称重，并在加入TRizol试剂混匀处理后，得到第一混合溶液，将所述第一混合溶液进行裂解；

在所述第一混合溶液中加入氯仿，混匀处理后，得到第二混合溶液，将所述第二混合溶液静置并离心；

获取离心后的所述第二混合溶液的上清液，并向所述第二混合溶液的上清液中加入预冷异丙醇，混匀处理后，得到第三混合溶液并对其离心；

在舍弃所述第三混合溶液的上清液后的剩余溶液中，加入乙醇洗涤沉淀后进行离心；

舍弃离心后的上清液，并蒸发剩余溶液中的乙醇；

加入RNase-free water溶解RNA；

测定总RNA浓度，并取RNA逆转录得到的cDNA后进行扩增。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述获取离心后的所述第二混合溶液的上清液，并向所述第二混合溶液的上清液中加入预冷异丙醇的步骤包括：所述第二混合溶液的上清液与所述预冷异丙醇的体积比为1:1。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，用于检测乳腺癌化疗过程中肿瘤细胞是否具有转移风险包括：

通过针对受试体的外周血液进行实时荧光定量PCR检测，得到第二PCR检测结果；

根据预设高危miRNA分级标准对所述第二PCR检测结果进行评估，得到转移评分。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述通过针对受试体的外周血液进行实时荧光定量PCR检测，得到第二PCR检测结果的步骤包括：

提取全血溶液，并在加入TRizol试剂混匀处理后，得到第一混合溶剂，静置所述第一混合溶剂；

在所述第一混合溶剂中加入氯仿，在静置处理后，得到第二混合溶剂，对所述第二混合溶剂进行离心；

获取离心处理后的所述第二混合溶剂的上清液，并向上清液中加入异丙醇，混匀处理后静置，得到第三混合溶剂；

对所述第三混合溶剂进行离心，并在舍弃离心后的所述第三混合溶剂的上清液后的剩余溶剂中加入乙醇，混匀处理后，得到第四混合溶剂；

对所述第四混合溶剂进行离心，舍弃所述第四混合溶剂的上清液；

干燥舍弃所述第四混合溶液的上清液后的剩余溶剂，并加入RNase-free water溶解RNA；

分光光度计测OD值，测定总RNA浓度，并取RNA逆转录得到的cDNA后进行扩增。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述提取全血，并在加入TRizol试剂混匀处理后，得到第一混合溶剂的步骤包括：所述全血与所述TRizol试剂的体积比例为1:10。