[发明专利]一种保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法

权利要求书

1.一种保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、aFGF蛋白的表达：将aFGF蛋白氨基酸编码序列插入含组氨酸标签的pET-11b质粒中后，导入到大肠杆菌BL21菌株中，当细菌密度生长至600nm下吸光度为0.4-0.8时，在18℃环境下由IPTG诱导aFGF蛋白表达12-18h，离心收集细菌；所述aFGF蛋白氨基酸编码序列源自UniProt数据库，编号为P05230，所选序列为16F-155D；

步骤2、aFGF蛋白的纯化：将步骤1中收集的细菌重悬在磷酸盐缓冲溶液中，并经超声裂解破碎将aFGF蛋白释放，细菌裂解液经肝素凝胶层析柱，使用洗脱液1洗脱得到aFGF蛋白粗品；aFGF蛋白粗品经镍离子凝胶层析柱分离，使用洗脱液2洗脱得到aFGF蛋白纯品液；

所述洗脱液1由三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液和NaCl配制而成，且所述三羟甲基氨基甲烷在所述洗脱液1中的质量浓度为50mmol/L，所述NaCl在所述洗脱液1中的质量浓度为1.5mol/L，所述洗脱液1的pH为7.2；

所述洗脱液2由三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液和咪唑配制而成，且所述三羟甲基氨基甲烷在所述洗脱液2中的质量浓度为50mmol/L，所述咪唑在所述洗脱液2中的质量浓度为0.3mol/L，所述洗脱液2的pH为7.2；

步骤3、脱盐：将步骤2中得到的aFGF蛋白纯品液装入透析袋中，再将透析袋置于磷酸盐缓冲溶液中脱盐，得到脱盐后的aFGF蛋白液；

步骤4、调整脱盐后的aFGF蛋白液的浓度，调整后的aFGF蛋白液的浓度为5-400μg/mL；

步骤5、配制保护剂溶液；

所述保护剂溶液按体积分数计由50％甘油与50％混合溶液组成，所述混合溶液由磷酸盐缓冲液及硫酸葡聚糖组成，且所述硫酸葡聚糖在所述磷酸盐缓冲液中的浓度为经步骤4调整后的aFGF蛋白液浓度的1-10倍；

步骤6、将经步骤4调整浓度后的aFGF蛋白液与步骤5中配制的硫酸葡聚糖溶液按体积比为1:1-10混合，得到混合液；

步骤7、将步骤6中的混合液分装，置于-20～-80℃冰箱中保存。

2.根据权利要求1所述的保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法，其特征在于，步骤1中所述离心转速为8000r/min。

3.根据权利要求1所述的保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法，其特征在于，步骤3中aFGF蛋白纯品液与磷酸盐缓冲液的体积比为1:50-200。

4.根据权利要求1所述的保护aFGF蛋白药物稳定性和活性的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.4。