[发明专利]用于预测乙肝患者肝癌易感性的引物、探针及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于预测乙肝患者肝癌易感性的引物、探针及试剂盒，属于体外核酸检测领域，用于预测乙肝患者肝癌易感性的试剂盒包括检测G1896A、A1762T和G1764A三个突变位点的引物和探针。本发明提供的引物、探针，检测结果与测序结果准确率高达100％；可同时检测位点的野生型、突变型，结果准确可靠；本发明检测的HBV基因组DNA浓度检测下限为100IU/mL，能够满足市场上低病毒浓度的基因检测需求；本发明提供的试剂盒不受样本例数的限制，可分配检测样本例数、样本例数少时无需攒样、出具实验结果快速便捷。

技术领域

本发明属于体外核酸检测领域，具体涉及一种用于预测乙肝患者肝癌易感性的引物、探针及试剂盒。

背景技术

乙型肝炎病毒HBV感染是导致肝癌发生的重要因素之一，乙型肝炎病毒(HBV)感染导致的肝癌占60％以上。乙肝患者慢性感染5年后，有10-20％的患者将发展为肝硬化，6-15％的慢性肝硬化患者和乙肝患者会发展为肝癌。肝癌是严重危害中国人生命健康的最主要癌症之一，是亟需解决的重大公共卫生问题。

临床上乙型肝炎E抗原(HBeAg)转印以及乙型肝炎E抗体(HBeAb)阳性常被认为是已产生抗病毒抗体，病毒的复制得到抑制，肝损伤和肝癌的发生风险降低，甚至可作为治疗的终止指标。但近年来研究表明HBeAg阴性患者发生肝癌的比例逐年增加，主要原因是虽然HBeAg为阴性但是病毒仍在复制，肝损伤仍在继续。

HBV基因组有四个基因区，分别为S，C，P，X区。C基因区包括preC(前C)区和C(core)区。C基因区突变导致HBeAg表达异常，最常见的突变为C区核心启动子(BCP)区的1762T和1764A的双突变，该突变导致前C区mRNA转录减少导致HBeAg合成分泌量降低。有研究表明preC区1896A的突变也会造成HBeAg的合成抑制甚至合成终止。有大量的研究表明肝癌患者中1896A的突变率为52％，1762T和1764A突变率为66％，具有显著的高突变率，HBV基因组的突变和乙肝患者发生肝癌相关。因此，检测HBV基因组突变有助于医生给予乙肝患者更精准的医疗建议。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种通过检测HBV基因组上的G1896A突变、A1762T和G1764A的双突变情况联合预测乙肝患者发生肝癌的风险的引物、探针及试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：用于预测乙肝患者肝癌易感性的引物和探针，包括检测G1896A、A1762T和G1764A三个突变位点的引物和探针：

检测G1896A的引物和探针的序列如SEQ ID No：1、SEQ ID No：2、SEQ ID No：5和SEQ ID No：6所示；

检测A1762T和G1764A的引物和探针的序列如SEQ ID No：3、SEQ ID No：4、SEQ IDNo：7、SEQ ID No：8、SEQ ID No：9和SEQ ID No：10所示。

本发明还提供了一种用于预测乙肝患者肝癌易感性的试剂盒，包括上述的用于预测乙肝患者肝癌易感性的引物和探针。

本发明的有益效果在于：本发明提供的引物、探针优点在于：检测结果与测序结果准确率高达100％；可同时检测位点的野生型、突变型；相比使用ΔCt值法的判断结果更易判断，结果可以通过分型软件准确分型，还可以通过荧光定量PCR曲线进行确认复核，结果准确可靠；本发明检测的HBV基因组DNA浓度检测下限为100IU/mL，能够满足市场上低病毒浓度的基因检测需求；本发明提供的试剂盒不受样本例数的限制，可分配检测样本例数、样本例数少时无需攒样、出具实验结果快速便捷。本发明在利用实时荧光PCR探针技术高灵敏度和高特异性的优点基础上，优选特异性好的引物及探针序列组成试剂盒，提高突变位点检测特异性。

附图说明

图1所示为本发明的具体实施方式的FAM通道HBV 1896G野生型扩增曲线图；