[发明专利]一种多重定量检测EB病毒和巨细胞病毒的试剂盒

说明书

本发明提供了一种多重定量检测EB病毒和巨细胞病毒的试剂盒，包括PCR反应液、PCR反应酶系、定量标准品、阳性质控品以及阴性质控品，所述PCR反应液包括PCR缓冲液、EB病毒和巨细胞病毒特异性的正、反向引物、EB病毒和巨细胞病毒特异性荧光探针；本发明应用实时荧光定量PCR技术，采用多重PCR引物和2种特异性荧光探针，通过双标准曲线法可以实现一个反应中同时对样本中的EB病毒和巨细胞病毒载量进行定值，可实现1管双重的定量检测，可广泛应用于EB病毒和巨细胞病毒相关疾病临床早期诊断、药物疗效、愈后监测及科学研究等多个领域，具有检测半自动化、检测速度快、灵敏高、适用样本范围广的特点。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体来说是涉及一种多重定量检测EB病毒和巨细胞病毒的试剂盒。

背景技术

EB病毒(EBV)和人巨细胞病毒(CMV)均属于人类疱疹病毒，在我国的感染率较高，是最常见病毒感染。多数人在幼年或青年时期获得感染，人巨细胞病毒原发感染和复发感染可以引起呼吸、神经、血液和消化系统等多系统疾病，严重者可危及患者生命，对人们的身体健康造成严重损害。EB病毒与传染性单核细胞增多症、鼻咽癌、淋巴瘤等疾病密切相关。人巨细胞病毒感染可累及消化道、中枢神经系统和肺等多种器官,在血液肿瘤移植患者中，巨细胞病毒的感染率高达32％～45％，病死率可达75％～90％。准确、快速、定量诊断EBV和CMV感染的方法在早期诊断和治疗中起到日益重要的作用。

目前检测EB病毒和人巨细胞病毒的金标准是病毒培养。针对不同病毒，采用的细胞略有不同，被病毒感染的细胞，在形态上会出现变化，出现细胞病变效应。病毒的细胞培养通常在发病后采集患者临床样本进行检测，操作繁琐，耗时长，对病情的及时诊断和疾病暴发的控制不利，较低载量的病毒及隐性感染均会导致漏检。传统的血清学检测虽然简便快速，但是敏感性较差，且不能对病毒的载量进行检测，应用实时荧光定量PCR技术检测样本中的EBV DNA和CMVDNA，比常规PCR技术灵敏度更高，且可以同时对2种病毒的载量进行定值，能够更为精确地反映患者EBV和CMV感染的状态。

国内外常见的EB病毒或巨细胞病毒检测试剂盒均为单一病毒检测，无法同时对EB病毒和巨细胞病毒进行定量，国内也有比较多的单个病毒定量或定性检测的发明专利，如发明专利CN201810631220.2、CN201710427671.X、CN201810979964.3，这些专利均为单独检测无法同时对EBV和CMV进行检测。国内发明专利CN201610567706.5虽然可以同时对巨细胞病毒和EB病毒进行检测，但是无法对两种病毒进行定量，只可进行定性检测无法进行病毒载量的定值。本发明基于国内无同时对EBV和CMV定量检测的情况，同时结合临床检测的意义，开发了一种双重荧光定量检测试剂，可同时对EB病毒和巨细胞病毒进行定性和定量的检测，对患者血浆中EBVDNA和CMVDNA的水平变化进行检测，以监测病毒水平的动态变化与患者病毒感染的预防、诊断与治疗的关系。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种多重定量检测EB病毒和巨细胞病毒的试剂盒。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种多重定量检测EB病毒和巨细胞病毒的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液、PCR反应酶系、定量标准品、阳性质控品以及阴性质控品，所述PCR反应液包括PCR缓冲液、EB病毒和巨细胞病毒特异性的正、反向引物、EB病毒和巨细胞病毒特异性荧光探针，其中，

所述EB病毒特异性正向引物的核苷酸序列为：5’GTTTGAAGGATGCGATTAAGGAC-3’，所述EB病毒特异性反向引物的核苷酸序列为：5’GGCAAATCTACTCCATCGTCAA-3’；

所述巨细胞病毒特异性正向引物的核苷酸序列为：5’ACGGGCGGTTTAATAATCACC-3’，所述巨细胞病毒特异性反向引物的核苷酸序列为：5’GTCGCGGTTACTAACACTCCT-3’；