[发明专利]一种基于钴纳米材料/核酸适配体的复合探针荧光“开-关-开”策略检测脑钠肽的方法

说明书

本发明公开了一种基于钴纳米材料/核酸适配体的复合探针荧光“开‑关‑开”策略检测脑钠肽的方法，首先合成了具有高效荧光猝灭作用的羟基氧化钴(CoOOH)纳米环，然后通过构建CoOOH纳米环/FAM‑aptamer复合探针，利用CoOOH纳米环对染料的荧光猝灭作用，降低背景信号；再利用BNP对FAM‑aptamer的特异性分子识别作用使荧光染料远离CoOOH纳米环，从而使荧光信号恢复。荧光恢复效率与BNP浓度在0.030‑0.80pg/mL范围内的线性关系良好，具有简单、快速、高灵敏、高特异性等优点，可用于临床标本中BNP定量检测。ROC曲线分析表明本方法诊断心衰的准确性较高(AUC＝0.87，95％CI:0.71‑1.00，P<0.01)，特异性好(诊断特异性为87.9％)。此外，本方法使用成本大大降低，适宜在基层儿童、成人心衰诊断及预后中广泛推广和使用。

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种利用钴纳米材料/核酸适配体复合探针高灵敏、高特异、低成本检测脑钠肽的荧光分析新方法。

背景技术

脑钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)已经成为心衰(Heart failure,HF)诊断的“金标准”，它是由32个氨基酸组成的多肽，主要在心室中合成，并且在压力和体积过载时释放，以保持血压和血浆容量的稳定。HF相关指南也把其应用价值列为ⅠA级推荐，BNP 释放入血后的病理生理作用为拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统、交感神经系统，具有利钠、利尿、舒张外周血管、降低血压、减轻心脏负荷及抗心肌纤维化作用。相比于耗时、昂贵且易受专家分析等主观因素影响的超声心动图、心电图和胸部X光等心衰诊断手段，BNP测定能够直接、客观的诊断心衰，不仅简单、客观、直接，而且成本低，更加有利于心衰的早期诊断及预后，从而能够有效改善心衰的发病率和死亡率。由于儿童心衰患病率较低，先天性异常(如室间隔缺损、房间隔缺损和动脉导管未闭)、紫绀性心脏病、梗阻性心脏病(如主动脉瓣狭窄)和炎症性心脏病(如川崎病)等心脏疾病和肾脏疾病会严重影响其血中BNP水平，导致目前用BNP诊断儿童心衰存在假阳性率极高的窘境，鉴于儿童临床标本的特殊性，高选择性、高特异、高诊断预测的BNP检测方法亟需开发。

BNP检测方法最初是放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)，但其灵敏度和准确度较差，检测前需要提取、纯化等操作；后来发展为免疫放射分析(immunoradiometricassay, IRMA)，其灵敏度、精密度和准确度较RIA均有提高，不需要分离和纯化血浆，但耗时且不适用于全自动分析系统分析；目前常用的检测方法为化学发光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay,CLIA)和免疫层析(Immunochromatography assay,ICA)，化学发光免疫分析灵敏度高，但其抗干扰性较差；免疫层析快速、简便、易携带，适用于床旁快速检测(Point-of-care testing，POCT),但灵敏度不够、易受干扰和准确度不高限制了该方法的实际应用。因此，开发快速、简便、高灵敏、高特异性、低成本检测BNP的新方法对于及时诊断心衰具有重大意义。