[发明专利]一种基于温皿制备干细胞膜片的方法

权利要求书

1.一种基于温皿制备干细胞膜片的方法，其特征在于，包括以下步骤

步骤1、对温皿进行预处理，

步骤2、进行细胞接种、培养，

步骤3、对培养后的细胞进行洗涤，

步骤4、进行膜片获取，

步骤5、将膜片移至普通培养皿中，

步骤6、将收获后的膜片进行再培养。

2.根据权利要求1所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，可制备所述膜片的细胞种类包括间充质细胞、上皮细胞、内皮细胞和子宫内膜细胞及其他可贴壁培养的细胞。

3.根据权利要求1所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述步骤1中对所述温皿的预处理方法，利用包括黏连蛋白、明胶、多聚赖氨酸、胎牛血清或自体血清，对所述温皿进行包被。

4.根据权利要求1所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述步骤2中细胞接种浓度包括：35mm--90mm皿细胞接种数量为2×10⁶--5×10⁸。

5.根据权利要求1所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述步骤2的培养过程中，所述膜片的细胞培养代数为10代以内。

6.根据权利要求1或5所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述步骤2的培养过程中，对细胞进行贴壁培养。

7.根据权利要求1所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述步骤3中对培养后的细胞进行洗涤的可使用的洗涤液包括PBS、D-HBSS+-液、生理盐水。

8.根据权利要求1所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述步骤4中膜片获取方式包括：

1)可将细胞培养皿放置冰块或冰袋上，

2)细胞从皿边缘开始脱离并向皿中央呈兜状卷曲，

3)枪头沿着培养皿壁划一圈使细胞从培养皿边缘脱离，

4)移液枪轻轻吹打细胞帮助细胞向中心卷起。

9.根据权利要求1-8之一所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述膜片的规格为1.5cm-6cm，所述膜片的形状为圆形，所述膜片的厚度为3-5mm。

10.根据权利要求1-9之一所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述细胞膜片的应用范围包括缺血引起的组织损伤修复、角膜修复、子宫内膜修复、食道癌术后狭窄、支气管胸膜漏气。

11.根据权利要求1-10之一所述的制备干细胞膜片的方法，其特征在于，所述细胞膜片可叠加。