[发明专利]一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1、R2、标准品以及质控品；

所述的试剂R1为包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1；

所述的试剂R2 为包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2；

所述的标准品为使用小牛血清梯度稀释的人钙卫蛋白抗原溶液；

所述的质控品为使用小牛血清梯度稀释的人钙卫蛋白抗原溶液。

2.根据权利要求1所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂R1制备方法如下：将胶乳颗粒在活化准备液的作用下形成活性酯，再将所述活性酯与含有钙卫蛋白单抗1的抗体溶液1反应，然后再加入封闭剂完成偶联，得到包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1。

3.根据权利要求2所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体溶液1中钙卫蛋白单抗1的的浓度为2mg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂R1制备方法如下：将胶乳颗粒在活化准备液的作用下形成活性酯，再将所述活性酯与含有钙卫蛋白单抗2的抗体溶液2反应，然后再加入封闭剂完成偶联，得到包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R1。

5.根据权利要求4所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体溶液2中钙卫蛋白单抗2的浓度为2mg/mL。

6.根据权利要求2或4所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的活化准备液为活化准备液1以及活化准备液2的组合物，其中所述的活化准备液1为N-羟基琥珀酰亚胺纯化水溶液，所述的活化准备液2为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐纯化水溶液。

7.根据权利要求6所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的活化准备液1的配制方法如下：准确称量50mg N-羟基琥珀酰亚胺，用2mL纯化水溶解，摇晃均匀得到活化准备液1；所述的活化准备液2的配制方法如下：准确称量30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，用4mL纯化水溶解，摇晃均匀得到活化准备液2。

8.根据权利要求2或4所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的封闭剂为2%BSA纯化水溶液以及5%吐温20纯化水溶液的组合物。

9.一种制备如权利要求1~8所述的人血清钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

（1）试剂R1的制备：制备包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1；

（2）试剂R2的制备：制备包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2；

（3）标准品的制备：以人钙卫蛋白抗原为母液，使用小牛血清梯度稀释母液，制备浓度为8 mg/L， 4 mg/L， 2 mg/L、1 mg/L以及纯小牛血清的校准品；

（4）质控品的制备：以人钙卫蛋白抗原为母液，使用小牛血清梯度稀释母液，制备浓度为1mg/L以及4mg/L的质控品；

（5）将试剂R1、试剂R2、标准品以及质控品单独分装，密封保存即得。

10.根据权利要求9所述的一种制备人血清钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，

所述制备包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1的具体步骤如下：

（1-1）在离心管内分别加入230μL纳米胶乳颗粒，300μLMES缓冲液，加入30μL 活化准备液1和30ul的活化准备液2，在37℃金属浴振荡器中震荡20min，4℃15000 r/min高速离心1小时，弃上清液；

（1-2）在沉淀中加入等体积的PBS缓冲液置于冰浴中，超声振荡3min，超声1秒，间隔3秒，再加入2mL PBS缓冲液，0.5mL抗体溶液1，在37℃金属浴振荡器中震荡60min，4℃15000r/min高速离心1小时，弃上清液；

（1-3）在沉淀中加入等体积的PBS缓冲液置于冰浴中，超声振荡3min，超声1秒，间隔3秒，再加入75μL 吐温20溶液和225μL BSA溶液，在37℃金属浴振荡器中震荡5min；

（1-4）继续加入3mLPBS缓冲液，在37℃金属浴振荡器中震荡10min；

（1-5）再加入0.06gPEG8000粉末，充分摇匀溶解；

（1-6）加入5μL ProClin 300，得到包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1；

制备包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2的具体步骤如下：

（2-1）在离心管内分别加入230μL 纳米胶乳颗粒，300μLMES缓冲液，加入30μL 活化准备液1和30ul的活化准备液2，在37℃金属浴振荡器中震荡20min，4℃15000 r/min高速离心1小时，弃上清液；

（2-2）在沉淀中加入等体积的PB缓冲液置于冰浴中，超声振荡3min，超声1秒，间隔3秒，再加入2mL PB缓冲液，0.5mL抗体溶液2，在37℃金属浴振荡器中震荡60min，4℃15000 r/min高速离心1小时，弃上清液；

（2-3）在沉淀中加入等体积的PB缓冲液置于冰浴中，超声振荡3min，超声1秒，间隔3秒，再加入75μL 吐温20溶液和225μL BSA溶液，在37℃金属浴振荡器中震荡5min；

（2-4）继续加入3mLPB缓冲液，在37℃金属浴振荡器中震荡10min；

（2-5）加入5μL ProClin 300，得到包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2。