[发明专利]Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体、制备方法及其在基因分型检测中的应用

说明书

本发明公开了一种Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体、制备方法及其在基因分型检测中的应用。Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体，其氨基酸序列由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成，连接肽位于重链可变区和轻链可变区之间。本发明Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体，不仅较高的功能稳定性，同时简化了制备程序和抗体结构，提高了制备效率，提高了抗体的效能，可作为单克隆抗体制备热启动酶，或作为所结合靶点的中和性抗体，实现抑制所结合靶点的功能。

技术领域

本发明涉及一种Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体、制备方法及其在基因分型检测中的应用，属于基因工程领域。

背景技术

如今，抗体的应用越来越广泛，包括检测相关抗原的表达、生产靶向药物等。工业上抗体的生产主要依靠纯化分泌相应抗体的杂交瘤细胞的上清液，但该过程中抗体相对应的杂交瘤细胞的获取难度较大，因此该种抗体制备的方法很难得到推广。利用基因工程手段，使细胞表达相应抗体的重链和轻链，在宿主细胞中进行异源表达后，通过一定的纯化手段获得抗体，该种方法易操作，容易推广。但重链和轻链两条链在宿主细胞内的异源表达与组装，效率较低，获得具有相对稳定功能的抗体较难，因此，如何在异源表达抗体并获得功能稳定性较高的抗体成了目前研究的热点。

Taq DNA聚合酶进行PCR反应时，由低温(30℃±10)升至高温(95℃±1)的过程中仍然具有残留的酶活性，因此在较低的温长度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结合，并在Taq DNA聚合酶的作用下延伸。结果会导致非靶序列的扩增，影响反应的特异性。热启动PCR(hot start PCR)是指使Taq DNA聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR，可提高反应的特异性。

发明内容

为了解决现有技术中存在的不足，本发明提供一种Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体、制备方法及其在基因分型检测中的应用，不仅可以保持抗体的功能和稳定性，同时简化了制备程序和抗体结构，提高了抗体的效能。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体，其氨基酸序列由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成，连接肽位于重链可变区和轻链可变区之间。

也即轻链的可变区、重链的可变区以及连接肽的组合形式可以为重链可变区-连接肽-轻链可变区或是轻链可变区-连接肽-重链可变区。本申请连接肽可以为柔性连接肽或刚性连接肽。

为了进一步提高产品的功能稳定性，优选，连接肽为(Gly4S)₃、(Gly4S)₄或(EAAAK)_n＝2-5；(Gly4S)₃的序列为(Gly Gly Gly Gly Gly Ser)_n＝3；(Gly4S)₄的序列为(GlyGly Gly Gly Gly Ser)_n＝4；(EAAAK)_n＝2-5的序列为(Glu Ala Ala Ala Ala Lys)_n＝2-5。

为了进一步提高产品的功能稳定性，优选，Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体的氨基酸序列连接His标签。

上述Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体的制备方法，将Taq DNA聚合酶单链免疫球蛋白IgG抗体的轻链可变区和重链可变区的基因序列进行密码子优化后，进行重链可变区-连接肽-轻链可变区或是轻链可变区-连接肽-重链可变区的组装，随后将其在宿主中表达表达和纯化，获得浓度及纯度均较高的免疫球蛋白IgG单链抗体。宿主为重组质粒转化得到的具有原核表达系统的基因工程菌或是具有真核表达系统的基因工程菌。也即本申请单链抗体的制备可以通过在原核细胞中进行异源表达，也可在真核细胞中进行异源表达。