[发明专利]一种准确检测天麻多糖回转半径及分子量分布的方法

说明书

本发明提供了一种准确检测天麻多糖回转半径及分子量分布的方法，其是采用非对称场流分离技术联用多角度激光光散射检测器和示差折光检测器分离表征天麻多糖并提供样品的回转半径和分子量分布等信息，在接近原位条件下对样品进行分离表征，发现并克服了在采用非对称场流分离技术检测天麻多糖过程中所存在的空间位阻的影响，得到更为准确的回转半径及其分子量分布，且结果重现性好，减少了分析时间，提高了检测效率，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种多糖的检测方法，具体地说是涉及一种准确检测天麻多糖回转半径及分子量分布的方法。

背景技术

天麻多糖是天麻重要成分之一，具有免疫、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等生物活性。研究表明，天麻多糖一般具有超高分子量和较宽的粒径分布，多糖的生物活性与其回转半径、分子量分布等紧密相关。因此，采用一种快捷的检测天麻多糖回转半径和分子量分布的分析方法对天麻多糖的活性研究是必要的。

目前，表征多糖分子量分布的常用方法为凝胶渗透色谱法（Gel permeationchromatography，GPC），其基于体积排阻的分离机理，通过具有分子筛性质的固定相对样品进行分离。GPC一般适用于分子量范围小于10⁷ g/mol的样品，对于超高分子量多糖样品（分子量大于10⁷ g/mol），GPC需对样品进行前处理，分离过程中存在的剪切力破坏多糖原有结构，导致无法准确测得天麻多糖的分子量分布。因此，发展一种适用于分离表征多分散性超高分子量的多糖样品的分析方法十分重要。

发明内容

本发明的目的就是提供一种准确检测天麻多糖回转半径及分子量分布的方法，以解决现有天麻多糖检测方法破坏其原有结构，无法准确测得天麻多糖回转半径和分子量分布的问题。

本发明的目的是这样实现的：

一种准确检测天麻多糖回转半径及分子量分布的方法，包括如下步骤：

（a）制备天麻多糖水溶液；

（b）采用非对称场流分离技术联用多角度激光光散射检测器和示差折光检测器（AF4-MALS-dRI）来分离表征天麻多糖水溶液中的天麻多糖回转半径和分子量分布，其中，洗脱流速采用指数衰减交叉流流速且初始流速为0.8~1 mL/min，半衰期为1.5~2.5 min。

步骤（a）中，所述天麻多糖水溶液的浓度为1~2 mg/mL；优选地，所述天麻多糖水溶液的浓度为1 mg/mL。

采用下述方法制备天麻多糖水溶液：将特定量的天麻多糖与纯水混合，制成所需浓度的天麻多糖水溶液；优选地，将其置于50℃水浴中，以200 rpm连续搅拌2 h，自然冷却至室温，取1 mL放入1.5 mL EP管内备用。

步骤（b）中，分离表征时所用载液包括NaNO₃ 和NaN₃的混合水溶液；具体地，所述载液为浓度为10 mM 的NaNO₃水溶液和3 mM NaN₃水溶液的混合液，其pH为7.00。

非对称场流分离技术与多角度激光光散射检测器和示差折光检测器（AF4-MALS-dRI）联用时，所用垫片高度为490 μm。

非对称场流分离技术与多角度激光光散射检测器和示差折光检测器（AF4-MALS-dRI）联用时，检测器流速为1 mL/min。

优选地，指数衰减交叉流流速由0.8~1 mL/min降至0.05 mL/min，；更优选地，所述初始流速为0.9 mL/min，即指数衰减交叉流流速为由0.9 mL/min降至0.05 mL/min。

优选地，所述半衰期为2 min；更优选地，所述交叉流流速检测程序如下表1所示：

表1 天麻多糖场流分离洗脱程序