[发明专利]改进的慢病毒载体

权利要求书

1.一种慢病毒载体，其包含用于指导编码感兴趣的多肽的核苷酸序列在宿主细胞中表达的截短的EF1α启动子，例如，所述截短的EF1α启动子是包含SEQ ID NO:13所示核苷酸序列的EF1α核心启动子。

2.权利要求1的慢病毒载体，其是非复制型慢病毒载体。

3.权利要求1或2的慢病毒载体，其还包含选自以下的至少一种元件：5’LTR、ψ元件、RRE元件、cPPT/CTS元件、用于插入编码感兴趣的多肽的核苷酸序列的多克隆位点、WPRE元件和3’LTR。

4.权利要求1-3中任一项的慢病毒载体，其包含可操作连接的5’LTR、ψ元件、RRE元件、cPPT/CTS元件、所述截短的EF1α启动子、WPRE元件和3’LTR，以及任选地，用于插入编码感兴趣的多肽的核苷酸序列的多克隆位点。

5.权利要求3或4的慢病毒载体，其中所述5’LTR包含SEQ ID NO:3或11所示核苷酸序列；所述ψ元件包含SEQ ID NO:4或12所示核苷酸序列；所述RRE元件包含SEQ ID NO:5所示核苷酸序列；所述cPPT/CTS元件包含SEQ ID NO:6所示核苷酸序列；所述WPRE元件包含SEQID NO:9或14所示核苷酸序列；其中所述3’LTR包含SEQ ID NO:10或15所示核苷酸序列。

6.权利要求1-5中任一项的慢病毒载体，其包含可操作连接的包含SEQ ID NO:11所示核苷酸序列的5’LTR，包含SEQ ID NO:12所示核苷酸序列的ψ元件，包含SEQ ID NO:5所示核苷酸序列的RRE元件，包含SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的cPPT/CTS元件，包含SEQ ID NO:13所示核苷酸序列的截短的EF1α启动子，包含SEQ ID NO:14所示核苷酸序列的WPRE元件，包含SEQ ID NO:15所示核苷酸序列的3’LTR，以及任选地，用于插入编码感兴趣的多肽的核苷酸序列的多克隆位点。

7.权利要求1-6中任一项的慢病毒载体，其还包含编码感兴趣的多肽的核苷酸序列。

8.权利要求1-7中任一项的慢病毒载体，其中所述感兴趣的多肽是包括多种蛋白的融合多肽，所述融合多肽中的所述多种蛋白由自裂解肽分隔开。

9.权利要求1-8中任一项的慢病毒载体，其中所述感兴趣的多肽是包括第一蛋白和第二蛋白的融合多肽，所述融合多肽在第一蛋白和第二蛋白之间包含自裂解肽。

10.权利要求8或9的慢病毒载体，其中所述自裂解肽是2A多肽，例如，所述自裂解肽选自P2A、F2A、E2A或T2A多肽，或其功能性变体。

11.权利要求9或10的慢病毒载体，其中所述第一蛋白是癌症相关抗原特异性受体蛋白，例如T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)。

12.权利要求9-11中任一项的慢病毒载体，其中所述第二蛋白是显性负性TGF-βII型受体。

13.权利要求12的慢病毒载体，其中所述显性负性TGF-βII型受体缺失TGF-βII型受体的胞内信号传导结构域，例如，所述显性负性TGF-βII型受体包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。

14.一种制备慢病毒载体颗粒的方法，所述方法包括：

a)使权利要求1-13中任一项所述的慢病毒载体、表达Gag和/或Pol的一或多种包装载体、表达包膜蛋白如VSV-G的包膜载体共转染合适的宿主细胞；

b)培养转染的所述宿主细胞以使所述慢病毒载体包装成慢病毒载体颗粒；以及

c)收获步骤b)中产生的慢病毒载体颗粒。