[发明专利]一种前列腺癌诊断标志物、测定方法及其应用

说明书

本发明属于生物医疗技术领域，特别涉及一种前列腺癌诊断标志物、测定方法及其应用。目的在于提出miR‑4456和miR‑1290能作为前列腺癌发病早期的诊断标志物，通过检测待测者血清中这两种微小RNA的表达水平，从而对前列腺患者做出快速无创的诊断，提高前列腺癌发病早期的诊断效率。其测定方法主要包括采集待测个体的外周血，收集血清；抽提血清中的miRNAs，并以此为模板将miR‑4456和miR‑1290逆转录为cDNA；分别用miR‑4456和miR‑1290特异性的RT‑PCR引物进行实时荧光定量PCR，获得这两个miRNAs的相对表达量，并进行数据对比分析。

技术领域

本发明属于生物医疗技术领域，特别涉及一种前列腺癌诊断标志物、测定方法及其应用。

背景技术

前列腺癌(Prostate Cancer)是泌尿生殖系统好发肿瘤之一，也是男性最常见的恶性肿瘤之一，并且全球范围内前列腺癌的发病率和死亡率呈现逐年升高的趋势，严重危害男性的健康和生活。前列腺癌的发病与多种因素有关，如：年龄、种族、基因、遗传、饮食习惯等，但前列腺癌发病的早期没有明显的临床症状，当出现膀胱刺激症或尿道梗阻时多数患者病情已发展至中晚期，失去最佳的治疗时机。目前对于前列腺癌的早期诊断大多是通过前列腺特异性抗原(PSA)进行筛查。PSA由于特异性有限，虽然是应用最广泛的前列腺癌肿瘤标志物，但一直存在争议。因此寻找更为高效的、快速的能够在早期以无创的方式诊断前列腺癌的方法或肿瘤标志物已经成为国内外学者关注的焦点。

随着第二代测序技术及高通量技术的发展，越来越多的研究发现肿瘤的形成及发生发展过程与微小RNAs(microRNA，miRNAs)的异常表达密切相关。MiRNAs是一类长度约为19-25nt的非编码RNA，由ATP依赖的核酸内切酶Dicer对带有发卡结构的miRNA前体(pre-miRNA)剪切后生成。MiRNAs在进化中高度保守，通过与靶基因3`非翻译区(3`-untranslated region，3`-UTR)完全配对结合或通过其5`端的种子序列(speed sequence)与靶基因3`-UTR不完全配对的方式诱导靶基因mRNA的代谢或抑制其翻译。肿瘤来源的miRNAs可通过破裂细胞或小囊泡体、细胞微泡进而释放进入到血液中并且在血浆和其它体液中稳定表达，因此，miRNAs可以作为某些疾病的生物标志物。

发明内容

本发明提供了一种前列腺癌诊断标志物、测定方法及其应用，目的在于提出miR-4456和miR-1290能作为前列腺癌发病早期的诊断标志物，通过检测待测者血清中这两种微小RNA的表达水平，从而对前列腺患者做出快速无创的诊断，提高前列腺癌发病早期的诊断效率。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种前列腺癌诊断标志物，包括miR-4456和/或miR-1290。

一种前列腺癌诊断标志物的测定方法，包括以下步骤：

S1：采集待测个体的外周血，待血液标本凝结后，收集血清；

S2：抽提血清中的miRNAs，并以此为模板将miR-4456和miR-1290逆转录为cDNA；

S3：分别用miR-4456和miR-1290特异性的RT-PCR引物进行实时荧光定量PCR，获得这两个miRNAs的相对表达量；

S4：将待测人员血清中miR-4456和miR-1290的表达量与标准品或正常人员血清中的表达量进行数据对比分析。

进一步地，步骤S2中，抽提的RNA浓度要求A260/280的比值在1.8-2.0之间。

一种前列腺癌诊断标志物在制备用于诊断前列腺癌的试剂盒中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：