[发明专利]一种基于便携式血糖仪的二抗

说明书

本发明公开了一种基于便携式血糖仪的二抗，具备两种功能域，分别行使结合IgG抗体和分解蔗糖的功能；其中，蔗糖分解后生成的葡萄糖可被便携式血糖仪检测。本发明成功实现了该二抗在大肠杆菌中的可溶表达，证明了该二抗在蔗糖水解能力和IgG抗体结合能力上不亚于游离的蔗糖酶和ZZ domain。并且本发明成功利用该二抗对相关抗原指标进行了检测，检测结果符合理论结果。为其后续在即时检验技术中的应用奠定了基础。

技术领域

本发明属于医学/食品检测技术领域，具体涉及一种基于便携式血糖仪的二抗。

背景技术

在临床检测和生命科学相关问题的研究当中，往往会涉及到各类免疫检测技术如最常见的酶联免疫法(ELISA)。在ELISA当中，由于一抗的来源不同，需要匹配不同的二抗，这也直接导致了相关实验成本的增加。此外，目前市面上的二抗或由碱性磷酸酶修饰、或由荧光基团修饰，或由过氧化物酶修饰，均需要大型的仪器设备进行来对结果进行表征，不仅受空间的限制，而且需要测定者具备一定的专业知识。为了发展简便的，低成本的分析方法进行相关指标的测定，需要开发出一种基于便携式仪器检测的更为的二抗。

近年来，即时检验技术(POCT)的出现给临床检测带来了新的方向，POCT是一种极具潜力的检测技术，其方便操作、成本低，仅需要一个小小的试纸或芯片，一个便携式的仪器即可以实现某些待测指标的快速检测。目前市面上为人所知且广泛使用的就有血糖仪、尿酸仪、验孕棒等。然而，上述制剂仅能检测单一的目标物，大大限制了其应用。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是通过融合表达手段联合ZZ domain以及蔗糖酶开发出一种基于便携式血糖仪的二抗，使得相关抗原/指标的表征更加便捷。本发明的另一目的是提供一种上述基于便携式血糖仪的二抗的制备方法。本发明还有一目的是提供一种上述基于便携式血糖仪的二抗的应用。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种基于便携式血糖仪的二抗，具备两种功能域，分别行使结合IgG抗体和分解蔗糖的功能；其中，蔗糖分解后生成的葡萄糖可被便携式血糖仪检测。

所述的基于便携式血糖仪的二抗，行使结合IgG抗体功能的域，为衍生于金黄色葡萄球菌Protein A的ZZ domain。

所述的基于便携式血糖仪的二抗，行使分解蔗糖功能的域，为蔗糖酶。

所述的蔗糖酶，来源于酿酒酵母。

一种制备所述的基于便携式血糖仪的二抗的方法，步骤如下：

1)以酿酒酵母的基因组为模板进行PCR扩增，获得Suc2基因片段；

2)以商业公司合成的pET22b-ZZ为模板进行PCR扩增，得到ZZ domain基因片段；

3)采用融合PCR技术将Suc2和ZZ domain基因片段融合成ZZ-Suc2和Suc2-ZZ两段融合基因片段；

4)采用大肠杆菌表达融合基因片段；

5)采用镍柱纯化方法纯化融合蛋白，获得二抗。

所述的制备所述的基于便携式血糖仪的二抗的方法，克隆Suc2基因使用的引物为：

Suc2-F：5’-GGAATTCCATATGACAAACGAAACTAGCG-3’

Suc2-R：5’-CCGCTCGAGTTTTACTTCCCTTACTTGGAAC-3’。

所述的制备所述的基于便携式血糖仪的二抗的方法，融合PCR使用的引物为：

Suc2-ZZ-F1：5’-GGAATTCCATATG ACAAACGAAACTAGCGATAGAC-3’，