[发明专利]一种防治慢性牙周炎的卵黄抗体的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种防治慢性牙周炎的卵黄抗体的制备方法，将超声破碎的牙龈卟啉单胞菌、福赛坦菌和直肠弯曲菌混匀，制备复合抗原，对蛋鸡进行初次免疫和加强免疫，共6轮，收集鸡蛋，分离并纯化特异性卵黄抗体。获得的卵黄抗体效价高，免疫效果好，可有效抑制牙龈卟啉单胞菌、福赛坦菌和直肠弯曲菌的生长，对治疗与预防慢性牙周炎明显的效果，且不会影响其他口腔无关菌群的生长，安全无害。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域。具体地，涉及一种防治慢性牙周炎的卵黄抗体的制备方法和应用。

背景技术

慢性牙周炎为临床常见病，多发病，疾病患者的牙龈上皮薄，极易受到牙口腔细菌感染，进而发生炎症。患者的牙龈极易受到牙龈边缘处积存食物残渣刺激，在此同时，因为受到菌斑、牙石以及食物残渣在生理间隙跟牙周不齐位置造成刺激的影响，加上口腔清洁卫生工作未进行彻底，因此慢性牙周炎很容易发生。

卵黄抗体又称卵黄免疫球蛋白，是禽类蛋黄中存在的唯一的免疫球蛋白，目前应用较多的是鸡卵黄抗体，是用抗原免疫产蛋母鸡后，鸡血清中可产生相应的抗体，母鸡又能以产蛋的方式将血清中的抗体有效地转移至卵黄中，不同的抗原免疫就会产生针对该抗原的特异性卵黄抗体；卵黄抗体无需采血符合现代动物保护规则，产生的抗体量大，专一性强，性质稳定，无毒副作用，且不仅具有能与抗原结合的能力还对抗原菌的生长具有显著的抑制作用。

专利CN106467572A公开了一种特异性复合卵黄抗体，通过将抗牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌和Solobacteriummoorei三种口腔厌氧菌混合，制备复合抗原，再免疫蛋鸡，获得特异性复合卵黄抗体，所述卵黄抗体对牙周病及口臭等有一定的抑制效果；然而其针对慢性牙周炎的主要致病菌并不具备良好的防治效果。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种防治慢性牙周炎的卵黄抗体的制备方法，所述特异性复合卵黄抗体专一性强，对牙龈炎的防治效果好，而且不会影响口腔内的正常菌群，绿色安全。

本发明的第二个目的是提供上述制备方法制备得到的特异性卵黄抗体。

本发明的第三个目的是提供所述特异性卵黄抗体的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种防治慢性牙周炎的特异性卵黄抗体的制备方法，是以牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis)、福赛坦菌(Tannerella forsythia)和直肠弯曲菌(Campylobacter rectus)为复合抗原并将其免疫蛋鸡后，收集免疫鸡蛋，除去蛋清，收集蛋黄，分离并纯化后制得。

本发明通过将与慢性牙周炎发生密切相关的三种细菌：牙龈卟啉单胞菌、粘福赛坦菌和直肠弯曲菌超声、混匀得到复合抗原，再将复合抗原免疫母鸡得到复合卵黄抗体，所述卵黄抗体对产生相应抗原的病原体的生长具有显著的抑制作用，对慢性牙周炎的防治有非常好的作用，且不会影响其他口腔无关菌群的生长，安全无害。

优选地，所述复合抗原由牙龈卟啉单胞菌、福赛坦菌和直肠弯曲菌的菌悬液经超声破碎后，按体积比1:1:1混匀制备得到。

优选地，所述菌悬液中的牙龈卟啉单胞菌、福赛坦菌和直肠弯曲菌的浓度分别为1×10⁷CFU/mL。

优选地，所述免疫为对蛋鸡进行初次免疫和加强免疫，共6轮；初次免疫使用弗氏完全佐剂疫苗，采用皮下多点注射的免疫方式，对每只母鸡的翅根下部及腿部注射0.5～0.8ml，初次免疫15天后进行第一次加强免疫，使用弗氏不完全佐剂疫苗，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5～0.8ml，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫5轮。

优选地，所述弗氏完全佐剂疫苗和弗氏不完全佐剂疫苗为将复合抗原分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂按体积比1:1:1混匀，充分乳化后制得。