[发明专利]一种基于双激发双发射的上转换发光纳米颗粒制备、层析试纸条及检测方法

说明书

本发明提供了一种基于双激发双发射的上转换发光纳米颗粒制备、层析试纸条及检测方法。该上转换纳米颗粒可以同时在两种的不同近红外光激发下发出红光、绿光或蓝光三种波段中任意两个波段，即一种近红外激发光可以激发一种波段的光。层析试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、底板组成，在硝酸纤维素膜设有检测线和质控线；结合垫上固定有双激发双发射的上转换发光纳米颗粒标记的检测物的抗体。本发明既可以同时检测两种组分的物质，也可以对单一组分的检测物实现双重认证。根据试纸条检测区上转换纳米颗粒的颜色变化，实现待检测试样中所含检测物的定性检测，根据。本发明方法及试纸操作简便，检测背景值低、信号稳定、灵敏性较高。

技术领域

本发明属于生物医学诊断技术领域，具体涉及基于双激发双发射的上转换发光纳米颗粒制备、层析试纸条及检测方法。

背景技术

环境和食品样品中的有害化学和生物污染物由于对生态系统的不利影响而成为全球关注的问题。这些物质来源于残留的医疗(药物污染物)，农业(杀虫剂)，生物(病原体及其释放的毒素)和工业(化学溶剂，工业副产品等)废物，这些物质致癌性极高，对人类健康造成不利的影响。因此，对于食品中致癌物的及时检测已成为现代生物医学的重大课题。

免疫层析试纸条是基于毛细管作用力，通过抗原抗体特异性的免疫反应，以条带显色对目标检测物进行定性或定量分析。上转换荧光纳米颗粒是将长波长的激发光(如近红外光)转换为短波长的发射光(如紫外光、可见光等)的纳米颗粒，一般通过颗粒的组成不同获得不同的吸收和发射光谱。与其他纳米颗粒相比，上转换荧光纳米颗粒毒性低、灵敏度高、稳定强，且受背景信号的干扰较少，因此，将UCNPs与免疫层析试纸结合，可以排除生物样品的自发光干扰现象，提高信噪比，增强灵敏度和稳定性，实现高灵敏度的定量检测。因而上转换荧光纳米颗粒成为生物体外检测的最佳选择之一。

上转换试纸检测快速，易操作，便携和成本便宜，所检测的致癌物常见的有：

1、黄曲霉素(AFT)

黄曲霉素是一类结构相似、致毒基团相同的次级代谢产物，主要是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一类毒素。黄曲霉素具有致癌、致畸、致突变的生殖毒性，其中黄曲霉素AFB1的毒性最大、危害最强。

但是现有的上转换试纸条在检测致癌物时，用于标记致癌物抗体的纳米颗粒只有一种检测信号，因而获得的待检测试样中所含致癌物浓度的定量检测结果有待商榷。

发明内容

为克服上述现有技术所存在的上述不足之处，本发明提供一种基于双激发双发射的上转换发光纳米颗粒制备方法和转换发光纳米颗粒，使上转换纳米颗粒具有两种信号，可以同时在两种的不同近红外光激发下发出红光、绿光或蓝光三种波段中任意两个波段，即一种近红外激发光可以激发一种波段的光。

本发明还提供一种采用上述双激发双发射的上转换发光纳米颗粒的层析试纸条及检测方法，可以同时检测两种组分的待检测物，也可以对单一组分的待检测物实现双重认证，并提高定量检测的准确度。。

为实现发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种双激发双发射的上转换纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(1)采用晶种法制备具有三层核壳结构的双激发双发射的上转换纳米颗粒，其以掺杂有Yb、Tm和Er的NaYF₄纳米颗粒为内核，在所述内核外包裹有Yb掺杂的NaYF₄第一壳层，且在所述第一壳层外包裹有Yb、Nd掺杂的NaYF₄第二壳层，构成Yb、Tm、Er和Nd共掺杂的NaYF₄:Yb/Tm/Er@NaYF4:Yb@NaYF₄:Yb/Nd核壳结构；制得水溶性的双激发双发射的上转换纳米颗粒UCNPs，该上转换纳米颗粒在近红外光980nm激发下发出红光，在近红外光808nm激发下发出绿光。