[发明专利]用于丝尾鱯性别鉴定的特异性DNA片段及应用

说明书

本发明属于水产养殖领域中的鱼类性别鉴定领域，具体涉及用于丝尾鱯性别鉴定的特异性DNA片段及应用，本发明在结合低覆盖度全基因组测序技术和2b‑RAD‑seq技术的基础上，并利用基因组步移技术，开发了丝尾鱯雄性性别特异性标记，所述的特异性DNA片段为SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.1所示，针对该特异性序列，可以利用常规PCR扩增对丝尾鱯的性别进行鉴定，经验证准确率达100%。与之前解剖检测或生殖突观察相比，该技术具有准确、简单、快速，对鱼体伤害少等优点，为丝尾鱯性控育种、野生资源保护和养殖产业的发展提供帮助。

技术领域

本发明属于水产养殖领域中的鱼类性别鉴定领域，具体涉及用于丝尾鱯性别鉴定的特异性DNA片段及应用。

背景技术

丝尾鱯(Hemibagrus wyckioides)是一种亚广盐性底栖鱼类，仅分布于我国澜沧江水系及下游的湄公河流域，因其尾鳍上叶延长成丝状而得名(褚新洛等,1990)。丝尾鱯其适应性强，易繁殖，抗病力强并且肉质鲜美，营养价值高，是非常值得开发和推广的名优养殖新品种，是云南最名贵的野生鱼类之一。但由于过度捕捞及澜沧江干支流水电站建设等原因，导致野生资源越来越少，因此需要对其野生资源进行保护。同时，丝尾鱯与许多经济鱼类一样，雌雄个体间存在着显著的生长差异，雄性个体的生长速度快于雌性个体，全雄鱼的培育对丝尾鱯的产业发展具有重要的意义。但是，丝尾鱯的亲本性成熟时间较长，长达3-5年，且在性成熟前雌雄个体之间没有明显的第二性征，在其发育早期无法从形态上辨别雌雄。传统的丝尾鱯性别鉴定一般采用进行生殖突的初步观察，再对雌鱼进行人工挤卵验证，雄鱼进行解剖观察性腺的方法判定，此方法对雄鱼早期鉴定的准确性有一定误差，也会造成亲本的浪费，进而影响了丝尾鱯品种选育、人工繁育以及野生资源的保护。因此急需开发性别精准鉴定技术，加速新品种选育技术，培育全雄丝尾鳠群体。DNA分子标记已成为鉴别鱼类性别的重要分子工具，尽管利用AFLP、微卫星和RAPD等传统的分子标记开发技术，在部分鱼类中已经成功开发出性别特异的分子标记(Bello&Sánchez,1999；Shan et al,2015；Pan et al,2015)，但是由于其遗传信息资源有限，在很多鱼类中无法检测到性别特异的DNA分子标记(Gao et al,2010；Sriphairoj et al,2007；Yarmohammadi et al,2011)。因此需要能够提供在基因组水平上更准确和快速的检测技术来鉴定丝尾鳠性别特异性标记。近年来，随着高通量测序技术的发展，测序技术作为一种高效且精确的手段被应用于分子标记的开发。为了得到高质量的丝尾鱯DNA性别特异分子标记，本发明在结合低覆盖度全基因组测序技术(genome survey)和2b-Restriction-Site Associated DNA sequencing(2b-RAD-seq)技术的基础上，并利用基因组步移技术，开发了丝尾鱯雄性性别特异性标记。

发明内容

本发明的目的在于提供了用于丝尾鱯性别鉴定的特异性DNA片段，所述的DNA片段分别为SEQ ID NO.2所示。

本发明的另一个目的在于提供了用于丝尾鱯性别鉴定的特异性DNA片段的组合物，所述的组合物包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列。

本发明还有一个目的在于提供了针对SEQ ID NO.2所示序列设计的引物。

本发明还有一个目的在于提供了针对SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列设计的引物组合物。

本发明的最后一个目的在于提供了丝尾鱯性别鉴定的特异性DNA片段的应用，该特异性DNA解决了丝尾鳠早期性别鉴定的难题，开展丝尾鳠性控育种，加快丝尾鳠选育进程，促进丝尾鳠养殖产业的发展。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

用于丝尾鱯性别鉴定的特异性DNA片段，所述的DNA片段分别为SEQ ID NO.2所示。