[发明专利]一种食品中猪源成分快速检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201910290288.3 | 申请日： | 2019-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN110195112A | 公开（公告）日： | 2019-09-03 |
| 发明（设计）人： | 许文涛;罗云波;黄昆仑;张超;杜再慧;马玉婷 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100083 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪源 核酸试纸条 快速检测 胶体金 试剂盒 检测 快速检测试剂盒 恒定 等位基因变异 核苷酸序列 检测灵敏度 内标准基因 发明试剂 反应结果 恒温扩增 鉴定技术 生物物种 实时检测 靶基因 靶序列 拷贝数 染色体 灵敏 筛选 物种 通用 观察 | ||
1.一种用于检测食品中猪源成分的基因，其为内标准基因，具有SEQ ID NO.1所示的序列。
2.权利要求1所述的基因在检测猪源成分中的应用。
3.权利要求1所述的基因在食品猪成分鉴定中的应用。
4.用于检测权利要求1所述基因的特异性LAMP引物组合，包括以下4条引物：
F3：5’-ACTTTTGGGTCAGAGATGGC-3’(SEQ ID NO.2)；
B3：5’-TGCGATTCCGTGCGC-3’(SEQ ID NO.3)；
FIP：5’-GCAGGGCTGGAAAATAGCCGGGGAAAGGAAACGCCGTGCA-3’(SEQ ID NO.4)；
BIP：5’-CCAGGTGCCCCCCAACTGTAGGGCTGGCGGTGGTA-3’(SEQ ID NO.5)。
5.权利要求4所述的特异性LAMP引物组合在猪源成分鉴定中的应用。
6.权利要求4所述的特异性LAMP引物组合在制备猪源成分检测试剂盒或检测试剂中的应用。
7.一种检测食品中猪源成分的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)待测样品提取DNA；
(2)以提取DNA为模板，采用权利要求4所述特异性LAMP引物组合进行LAMP检测；
(3)结果判断：采用胶体金核酸试纸条进行结果判断，检测T线和质控C线均有红色条带，含有目的基因；质控C线有红色条带，而检测T线无条带，不含有目的基因。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述LAMP检测，其25μL LAMP检测体系的具体配置为：1×Thermopol buffer，0.4mM dNTP，3mM MgSO4，1.0M甜菜碱，1.6μM引物FIP，1.6μM引物BIP，0.2μM引物F3，0.2μM引物B3，8 U Bst DNA聚合酶大片段。
9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，LAMP检测反应条件为：60-65℃恒温20min，85℃5min，然后终止反应。
10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的胶体金核酸试纸条包含胶体金核酸试纸条测试线与质控线，测试线标记有FITC抗体，质控线标记有生物素二抗，结合垫有胶体金-生物素抗体标记物。
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