[发明专利]一种5-氨基乙酰丙酸高产重组菌株及其用途

权利要求书

1.一种用于制备5-氨基乙酰丙酸的DNA片段，其特征在于：它包括表达hemA基因的单元A和沉默hemB基因的单元B；

所述单元A为SEQ ID NO.1所示的序列；所述单元B为SEQ ID NO.4所示的序列；

所述单元B包括hemB基因的反义序列；所述反义序列与hemB基因的起始密码子上游-57nt到起始密码子下游139nt的区间反向互补；

所述单元B的反义序列两端含有序列C和序列D；所述序列C和序列D反向互补配对；所述配对末端序列长度为25~45bp；

所述单元A和单元B都带有启动子和终止子序列。

2.如权利要求1所述的DNA片段，其特征在于：所述配对末端序列长度为38bp。

3.如权利要求1所述的DNA片段，其特征在于：所述启动子是trc启动子；和/或所述终止子是rrnB终止子。

4.一种重组质粒，其特征在于：它包括权利要求1~3任一所述的DNA片段。

5.一种重组菌，其特征在于：它是含有如权利要求4所述重组质粒的大肠杆菌。

6.如权利要求5所述的重组菌，其特征在于：所述大肠杆菌是稀有密码子优化型大肠杆菌Rosetta（DE3）。

7.权利要求4~6任一项所述质粒或重组菌在制备5-氨基乙酰丙酸中的用途。

8.一种制备5-氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将如权利要求5或6所述重组菌接入含卡那霉素25 µg/mL的发酵液体培养基中，37℃震荡培养；

（2）到OD_600nm为0.5~0.7时，往培养基加入异丙基硫代半乳糖苷，使后者的终浓度为0.1mM，于28℃震荡培养；

（3）收集并破裂重组菌菌体，提纯5-氨基乙酰丙酸。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤（2）所述OD_600nm为0.6时，开始加入异丙基硫代半乳糖苷。