[发明专利]一种用于筛选人前列腺癌肿瘤抗原表位肽的方法

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种用于筛选人前列腺癌肿瘤抗原表位肽的方法。该方法操作简单，可以通过小鼠人前列腺癌肿瘤的质量来判定人前列腺癌肿瘤抗原表位肽的免疫活性，从而筛选出具有免疫活性的人前列腺癌肿瘤抗原表位肽。该方法可以用于治疗前列腺癌疫苗的评价。该方法通过动物模型进行评价，克服了目前实验动物缺乏表达人肿瘤抗原的表位肽而不能被直接用于人用肿瘤疫苗的体内评价的问题。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种用于筛选人前列腺癌肿瘤抗原表位肽的方法。

背景技术

随着免疫学理论、基因工程、蛋白质工程的发展，以及免疫检测技术和计算机技术的广泛应用，蛋白质抗原表位的筛选有了新的突破。基于80年代 Hopp和Woods提出的亲水性参数，对抗原表位预测已发展出了很多参数和算法。此外，利用噬菌体随机肽库技术也能成功筛选出模拟抗原表位序列，然而在评估抗原表位的肿瘤免疫效应中，通过计算机模拟预测出来的抗原表位，或噬菌体随机肽库鉴定出来的表位不一定具有免疫原性，无法在体外细胞增殖实验中有效刺激T、B淋巴细胞，或无法在机体内有效刺激机体产生预期的细胞和体液免疫应答。因此，为了筛选出能有效诱导抗肿瘤效应的抗原表位，仅仅基于线上模拟和体外检测是不够的，体内抗肿瘤免疫活性评价必不可少。然而，实验动物缺乏表达人肿瘤抗原的表位肽而不能被直接用于人用肿瘤疫苗的体内评价。

发明内容

本发明提供了一种用于筛选人前列腺癌肿瘤抗原表位肽的方法，解决了现有的实验动物缺乏表达人肿瘤抗原的表位肽而不能被直接用于人用肿瘤疫苗的体内评价的问题。

其具体技术方案如下：

本发明提供了一种用于筛选人前列腺癌肿瘤抗原表位肽的方法，包括以下步骤：

步骤1：将表达人前列腺癌肿瘤抗原的全蛋白的重组质粒转染至鼠源前列腺癌细胞RM-1，得到表达人前列腺癌抗原的全蛋白的RM-1；

步骤2：将所述人前列腺癌肿瘤抗原的表位肽接种至小鼠中，得到含有所述人前列腺癌肿瘤抗原的表位肽的第一处理小鼠；

步骤3：将所述表达人前列腺癌肿瘤抗原的全蛋白的RM-1分别接种至所述第一处理小鼠和未接种所述人前列腺癌肿瘤抗原表位肽的第二处理小鼠中，得到第三处理小鼠和第四处理小鼠；

步骤4：比较所述第三处理小鼠和所述第四处理小鼠的人前列腺癌肿瘤的大小，若所述第三处理小鼠的人前列腺癌肿瘤的质量小于所述第四处理小鼠人前列腺肿瘤的质量，则所述人前列腺癌肿瘤抗原表位肽具有抗人前列腺癌肿瘤免疫活性。

本发明中，步骤1之前还包括：表达人前列腺癌肿瘤抗原的全蛋白的重组质粒的构建；构建完成后，还包括：使用分光光度计定量重组质粒浓度与纯度和G418筛选。当重组质粒的OD₂₆₀/OD₂₈₀比率在1.7-1.9范围内，则表明质粒纯度高，适用于转染小鼠前列腺癌细胞RM-1；G418筛选浓度为800 μg/mL。

本发明步骤2中，人前列腺癌肿瘤抗原的表位肽采用滴鼻的方式进行接种，每5天接种1次，接种的次数为5次；第二处理小鼠为采用滴鼻的方式接种PBS的小鼠，其中，PBS的接种剂量与第一处理小鼠接种的人前列腺癌肿瘤抗原表位肽的剂量相同。

本发明步骤3中，第一处理小鼠接种表达人前列腺癌肿瘤抗原的全蛋白的RM-1的时间为小鼠最后一次接种人前列腺癌肿瘤抗原的表位肽或PBS的第10天；接种采用皮下注射的方式；接种完成后，培养第三处理小鼠和第四处理小鼠20天，测量肿瘤大小与质量。