[发明专利]检测抗菌粉体材料诱发活性氧在细胞内富集水平的方法在审
| 申请号： | 201910235209.9 | 申请日： | 2019-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN110055302A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 唐晓宁;陈一凡;张彬;罗勇;蒋先发 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/18 | 分类号： | C12Q1/18;G01N21/64;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 650093 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 活性氧 抗菌粉体 诱发 富集 电子自旋共振 高灵敏检测 化学发光法 细胞 结合生物 荧光探针 荧光信号 分析物 种检测 检测 抗菌 杀菌 体内 局限 分析 研究 | ||
1.一种检测抗菌粉体材料诱发活性氧在细胞内富集水平的方法，其特征在于按以下步骤进行：
（1）将细菌菌株接种至液体培养基中，培养至对数生长期形成细菌悬液，细菌悬液的OD600值为1；
（2）将细菌悬液用液体培养基进行稀释，稀释至CFU为5-6×108个/mL；
（3）在5-10mL的稀释菌液中加入100-300μL浓度为 1×10-5-3×10-5mol/L的DCFH-DA 荧光染料液，混匀；该步骤混合液留存一份作为对照样；
（4）然后在混合液中加入0.01g-0.1g抗菌粉体，在37℃下振荡混合20-30min，离心收集沉淀，用pH7.2-7.4的PBS 缓冲液清洗2-3次后，离心沉淀再用PBS 缓冲液制成细菌悬液；
（5）用荧光分光光度计检测步骤（4）细菌悬液和对照样的DCF 荧光信号值，所测得的荧光强度值与活性氧水平成正比；由于对照样品没有活性氧存在，通过与对照样品的荧光强度值比较，判断活性氧进入细胞体内的富集水平。
2.根据权利要求1所述的检测抗菌粉体材料诱发活性氧在细胞内富集水平的方法，其特征在于：细菌菌株为大肠杆菌BL21。
3.根据权利要求1所述的检测抗菌粉体材料诱发活性氧在细胞内富集水平的方法，其特征在于：离心转速为8000-8500 r/min。
4.根据权利要求1所述的检测抗菌粉体材料诱发活性氧在细胞内富集水平的方法，其特征在于： DCFH-DA 荧光染料的激发波长为490±5nm，发射波长为505±5nm。
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