[发明专利]P14.7蛋白质及其作为疫苗佐剂的用途

说明书

本发明提供了不使用常规佐剂(如铝盐佐剂，水包油乳剂佐剂，Toll样受体激动剂佐剂等)刺激针对抗原的免疫应答的组合物及该组合物的制作和使用方法。该组合物含有p14.7蛋白质和需要刺激的免疫反应的抗原。p14.7蛋白质起着佐剂作用，使得对包含p14.7的组合物刺激的抗原的免疫应答强于单独抗原刺激的免疫应答。该本发明提供了一种生产热稳定疫苗的方法和一种通过疫苗冻干处理来避免冷链维持的简单策略。

发明领域

本发明涉及疫苗，更具体地说，涉及能增强该疫苗针对抗原免疫应答的疫苗佐剂。

背景技术

疫苗接种是现代医学中预防和控制疾病最经济，最有效的措施之一。自从1796年Edward Jenner第一次使用天花疫苗以来，疫苗便成为根除疾病不可或缺的手段之一(GaryJ.Nabel，2013)。疫苗被用来引发针对特定抗原的特异性免疫应答。例如，针对病毒或细菌的疫苗被用来预防或限制由相应病原体引起的感染(I.P.Nascimento等，2012)，针对肿瘤特异性抗原的疫苗被用来治疗肿瘤(Tagliamonte M等，2014)。然而，对于未受过刺激的免疫系统，靶抗原通常自身不能刺激强烈的免疫反应。特别当靶抗原是分离的或合成的肽化合物时，免疫系统常常不能产生强烈的免疫应答。为了克服这一点，商业疫苗制剂通常不仅包含靶抗原，而且还包含疫苗佐剂(Alberta Di Pasquale等，2015)。

疫苗佐剂是能增强机体对靶抗原特异性免疫反应的颗粒，固体或可溶性试剂。疫苗佐剂以各种方式增强机体对靶抗原的免疫应答。疫苗佐剂常被用来增强弱抗原的免疫原性和弱抗原的疫苗效力。疫苗佐剂也常被用来提高对强抗原的免疫反应速度，活力和持久性。疫苗佐剂还可在免疫系统不成熟，免疫抑制或衰老的个体中作为免疫增强剂使用。此外，疫苗佐剂可以有效地减少抗原剂量，有效地减少提供保护所需的疫苗注射次数(RobertL等，2010；Marciani DJ，2003)。

1926年Glenny及其同事观察到被铝盐沉淀的白喉类毒素能刺激出比可溶性白喉类毒素更强的免疫反应(A.P.C.Glenny等，1926)，从此抗原与含铝佐剂一直被混合着使用。在医药中使用最广泛的疫苗佐剂是含铝佐剂，它以铝盐的形式存在于人类和兽类的疫苗中。对于成分中含有铝盐佐剂的疫苗，疫苗的稳定性是一个需要考虑的问题。含有铝盐佐剂的疫苗在经历冻和融的过程后免疫功效会明显降低。冻和融的过程会导致含有铝盐佐剂的疫苗附聚和疫苗效力的丧失。此外，铝盐佐剂虽然能刺激对特定抗原的强烈免疫反应(Baylor NW等，2002)，但有多篇文献报道它可能会有一定程度的毒性作用(神经毒性，引发自身免疫等)(Kumar V等，2009；Shaw CA1等，2013)。铝盐作为疫苗佐剂的安全性问题仍然需要继续关注(Tomljenovic L.等，2011)。

由于与传统的铝盐佐剂相比，水包油型乳液佐剂引发免疫反应的质量大幅提高，水包油型乳液佐剂正越来越多地被用于疫苗中(G.Leroux-Roels，2010；F.R.Vogel等，2009)。然而，大多数水包油型乳液佐剂不能冷冻或冻干保存，并且当长期储存为液体共制剂时，水包油型乳液佐剂可能对蛋白质抗原的稳定性具有有害影响。通常，蛋白质抗原和水包油型乳液佐剂必须在施用前混合在一起才能获得最佳免疫效果(G.L.B.Gary Ott等，1995)。

Toll样受体(TLR)类别佐剂涵盖了极其广泛的病原体衍生化合物，包括核酸，脂肽，糖脂，及其类似物等(Petrovsky N等，2004)。所有的TLR激动剂可以通过TLR衔接蛋白，MYD88和TRIF来激活炎性转录因子NFkB(Verstak B等，2007)。NFkB活化的结果之一是产生热原和炎性细胞因子。有多篇文献报道NFkB的活化与慢性炎症和自身免疫疾病有关(Collins SE等al，2014；Akbar Mohammad Hosseini等，2015)。