[发明专利]ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法检测抗菌皮革防霉性能的方法

说明书

本发明涉及一种抗菌皮革防霉性能的检测方法，检测步骤包括：样品制备及前处理；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及孢子液制备；OD值‑活菌含量对数值lgC_B标准曲线建立；ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标准曲线建立及接种菌液活菌C_A标定；样品接种、培养及洗脱回收；回收液I_A测定及其活菌ATP浓度C_A和T_A推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的皮革防霉性能进行精准定量测试。本发明规定洗脱回收接触0h及培养48h后的对照样品和抗菌样品，测定回收液I_A并以lgI_A表征和计算R或A。本发明研发的皮革防霉性能检测的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标准曲线法，将以科学先进的检测技术支撑产品质量提升。

技术领域

本发明涉及抗菌皮革的防霉性能测试方法，具体是一种应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的抗菌皮革防霉性能进行精准定量检测的ATP生物荧光lgC_A-lgI_A标准曲线法，属于皮革抗菌功能检测技术领域。

背景技术

皮革是人类生活必需品，由于制革过程中引入大量加脂剂且所用原料皮富含蛋白质，脂肪等营养成分，导致其极易遭受细菌、真菌等微生物侵染。伴随着人们生活水平提高和健康意识增强，对皮革产品抗菌性能要求不断攀升；抗菌皮革应运而生，目前在日用品、服装鞋帽、公共设施等领域应用广泛，抗菌技术在皮革产业的应用和普及势不可挡，因此，相关质检技术和标准化要求逐渐被提上日程。

目前，国内外抗菌材料性能检测技术体系主要针对细菌和真菌，其中防霉检测方法基本源自美标、日标和欧标，所涉标准主要包括基于土埋培养法、琼脂平板法和湿室培养法的ISO 846:1997《塑料制品的抗菌培养评估》、DIN 53793《抗菌高分子材料的抗真菌测定方法》和GB/T 24128-2009《塑料防霉性能试验方法》、QB/T 4199-2011《皮革防霉性能测试方法》等。总体而言，现有防霉性能检测方法在技术内容和实际应用中存在以下共性问题：一是由于霉菌孢子生长过程中形成的菌丝体无法准确计数，只能进行定性判定，无法定量测试；二是因霉菌生长周期较长，培养时间至少2周～4周，导致测试周期较长，时间及经济成本高；三是实验过程繁琐，技术难度较高；相关操作受人为因素影响大，使得测试误差大，缺乏可比性。近年来，在国际细菌检测技术领域ATP荧光分析法发展日益成熟，与传统平皿法相比检测结果相关性为98％，准确度高且可实现快速检测。受需求牵引，国外抗菌材料性能检测技术研究领域针对当前定量化、快速化和简易化发展趋势，已借鉴ATP荧光分析原理制定ISO 20743:2007-2013《Textiles-Determination of antibacterial activity oftextile products(纺织品-抗菌整理纺织品的抗细菌性能测定)》和ISO 13629-1:2012《Textiles-Determination of antifungal activity of textileproducts.Part1Luminescence(纺织品-抗菌整理纺织品的防霉性能测定)》，规定了以样品接种后ATP含量变化表征抗细/霉菌性能的荧光测定法，但其仅适用于具有吸水性且对照样细/霉菌增长值＞0的纺织或微孔材料，在活菌回收方式、试验有效条件等关键技术方面不适用于具有非吸水性硬质表面且对照样霉菌增长值＜0的皮革、塑料等材料，同时未提供测量不确定度评估。另外，该标准方法相关抗菌性能表征参数较为单一，仅涉及抗菌活性值A，而我国则惯用抗菌率R。

因此，为抵御国外技术壁垒，规范国内市场秩序，推动产业转型升级，亟待研究科学先进、准确性和重现性高、简便易行的抗菌皮革性能测试技术；本专利技术路线设计接轨国际，检测方法属全球首创，可有效填补国内外相关技术领域空白。

发明内容