[发明专利]具有突变衣壳的腺相关病毒病毒体及其应用

说明书

本发明公开了一种具有突变衣壳的腺相关病毒病毒体及其应用。所述具有突变衣壳的腺相关病毒病毒体具有突变AAV6衣壳蛋白，所述具有突变衣壳的腺相关病毒病毒体赋予增强的嗜视网膜Müller细胞的感染性。其中相对于相应亲本AAV6衣壳蛋白，所述突变AAV6衣壳蛋白的氨基酸序列中第663位丝氨酸突变为亮氨酸。所述药物组合物包含所述腺相关病毒病毒体和药学上可接受的赋形剂。本发明通过对编码AAV6衣壳的氨基酸定点突变，获得特异高效转导Müller细胞的AAV载体，适用于携带外源治疗基因转导Müller细胞来治疗视网膜病变的方法。

技术领域

本发明涉及一种重组AAV病毒体，具体涉及一种在选定的腺相关病毒(AAV)序列中单点氨基酸突变以赋予其靶向视网膜Müller细胞的方法，以及在携带外源治疗基因转导Müller细胞来治疗视网膜病变中的应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

视网膜疾病是导致失明的主要原因之一，常见的有黄斑变性、糖尿病视网膜病变、青光眼、遗传性视网膜病变等。其中，大部分病变由基因突变、蛋白不工作或过表达引起异常，进而导致视细胞死亡，最终致盲。通过基因治疗可以介导正确基因或敲除异常基因，恢复正常表达，进而起到恢复视功能作用。

腺相关病毒(Adeno-associated virus，AAV)属于微小病毒科依赖病毒属的一员，它是一个直径约为20～26nm的二十面体，携带有4.6～4.8kb的线性单链DNA基因组。目前已经从许多哺乳动物包括人的体内分离到13种血清型及120多种突变型的AAV病毒。AAV作为基因载体在基因治疗应用中有其他病毒载体或非病毒载体所不具备的优点：(1)既可以感染分裂细胞，也可以感染静止细胞；(2)AAV是目前所知的唯一能定点整合到人类基因组特定位点的基因载体，且整合位点安全可靠；最重要的是，虽然80-90％的人类呈AAV阳性，但没有报道AAV引起任何疾病。目前为止，全世界已有33项眼部疾病基因治疗研究进入临床试验，其中有23个临床试验项目是由AAV作为基因治疗载体。美国基因治疗药物公司SparkTherapeutics，用AAV载体携带RPE65基因治疗RPE65基因突变所导致的Leber先天性黑朦(LCA2)的药物，已获得美国FDA批准上市。

已证实AAV可以感染多种视网膜细胞，包括光感受器细胞、视网膜色素上皮细胞(RPE)、Müller细胞、视网膜神经节细胞和角膜内皮细胞。Müller细胞是脊椎动物视网膜内最主要的神经胶质细胞，它贯穿整个视网膜，Müller细胞对于维持神经元的完整性、代谢、内环境稳态以及信号转导等均具有重要的作用。近10年来的研究表明，Müller细胞不管是在形态上还是在功能上都表现有视网膜干细胞潜能。在视网膜病变时，Müller细胞参与整个过程，并且在视网膜的各种疾病中都发现伴有Müller细胞的神经胶质增生反应。Müller细胞同时也调控视网膜病变的整个过程，Müller细胞膜上的神经递质受体、谷氨酸受体、门控电压通道、所合成分泌的营养因子及自身增殖分化都发生改变。

但是，目前尚未有任何关于重组AAV病毒体高效靶向视网膜Müller细胞，及被施用于Müller细胞基因治疗视网膜病变方面的报道。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种具有突变衣壳的腺相关病毒(AAV)病毒体，以克服现有技术中的不足。

本发明的另一目的还在于提供包含前述腺相关病毒病毒体的突变AAV6衣壳蛋白。

本发明的另一目的还在于提供药物组合物及其用于将基因产物递送至个体的视网膜Müller细胞的药物中的用途。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种具有突变衣壳的腺相关病毒病毒体，它具有单个氨基酸突变AAV6衣壳蛋白，所述具有突变衣壳的腺相关病毒病毒体赋予增强的嗜视网膜Müller细胞的感染性。

本发明实施例还提供了包含编码前述腺相关病毒病毒体的组合物，其包含：