[发明专利]一种磁微粒化学发光免疫检测CA125表面Tn抗原的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种磁微粒化学发光免疫检测CA125表面Tn抗原的试剂盒，其特征在于，包括偶联有CA125抗体Fab片段的磁分离试剂，含有唾液酸酶的能够识别Tn抗原的生物素-长柔毛野豌豆凝集素试剂，具备检测信号放大功能的链霉亲和素-生物素-碱性磷酸酶偶联试剂。

2.如权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测CA125表面Tn抗原的试剂盒，其特征在于，还包括化学发光底物液、洗涤液和校准品工作液。

3.如权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测CA125表面Tn抗原的试剂盒，其特征在于，所述CA125抗体为Ov185单克隆抗体；所述含有唾液酸酶的能够识别Tn抗原的生物素-长柔毛野豌豆凝集素试剂为含有唾液酸酶的能够识别Tn抗原的生物素-长柔毛野豌豆凝集素试剂。

4.如权利要求1~3任一项所述的磁微粒化学发光免疫检测CA125表面Tn抗原的试剂盒，其特征在于，所述CA125抗体Fab片段由以磁微珠为载体的固定化木瓜蛋白酶进行酶切制备而得，具体包括以下操作步骤：

1）准确量取一定质量固定化木瓜蛋白酶于一定体积的容器中，容器置于磁架，固定化木瓜蛋白酶沉淀后去除上清，使用0.01M的PBS缓冲溶液进行洗涤备用；

2）准确量取0.1-0. 2倍固定化木瓜蛋白酶质量的CA125抗体，使用PD-10脱盐柱和含0.02M EDTA及0.02M半胱氨酸的0.01M PBS缓冲液对其进行脱盐处理，脱盐完成后将其稀释或浓缩为0.1-0. 2倍固定化木瓜蛋白酶质量数的体积；

3）将步骤1）中备用的固定化木瓜蛋白酶溶液置于磁架，留沉淀去除上清，将步骤2）中脱盐后的CA125抗体溶液加入其中，于37℃条件下酶解3-4小时；

4）酶解结束后将步骤3）中溶液置于磁架，固定化木瓜蛋白酶沉淀后收集上清，此上清液中含CA125抗体Fab片段。

5.如权利要求4所述的磁微粒化学发光免疫检测CA125表面Tn抗原的试剂盒，其特征在于，所述以磁微珠为载体的固定化木瓜蛋白酶由以下方法制备获得：包括以下操作步骤：

Ⅰ、准确量取一定质量Fe₃O₄纳米磁颗粒于一定体积的容器中，置于磁架，沉淀后去上清，使用0.1-0.5倍磁珠质量数的纯水洗涤两次，清洗完成后加入0.1-0.5倍磁珠质量数的0.01M PBS缓冲液，后加入0.04-0.08倍磁珠质量的木瓜蛋白酶，室温混匀1-2小时；

Ⅱ、混匀结束后将磁珠溶液置于磁架，沉淀后去上清，加入0.1-0.3倍磁珠质量数的0.2mM盐酸缓冲液，室温混匀10-15分钟；

Ⅲ、混匀结束后加入0.002-0.006倍磁珠质量数的0.5M pH=7.4±0.1的HEPES缓冲液，调整pH至7.3±0.1，37℃混匀1-2小时；

Ⅳ、混匀结束后加入1.5-4.5倍磁珠质量的甘氨酸，37℃混匀0.5-1小时；

Ⅴ、混匀结束后将磁珠溶液置于磁架，沉淀后去上清，使用0.1-0.3倍磁珠质量数的3MpH=8.6±0.1的NaHCO₃缓冲液，洗涤两次；

Ⅵ、洗涤完成后，将磁珠溶液置于磁架，沉淀后去上清，加入0.1-0.3倍磁珠质量数的磁珠保存液，于2~8℃进行保存。