[发明专利]基于纳米酶的HPV16核酸检测试纸条

说明书

本发明涉及一种基于纳米酶的HPV16核酸检测试纸条。试纸条同时利用了纳米酶的磁性和过氧化物酶活性，具体如下：一次纳米酶富集后起到了核酸浓缩的作用；层析结束后，利用纳米酶的过氧化物酶活性，加入显色液进行信号放大，起到了灵敏度提高的作用。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体的，涉及一种基于纳米酶的HPV16核酸检测试纸条。

背景技术

磁性纳米颗粒具有良好的生物相容性，其既具有纳米材料所特有的性质，如粒径小、比表面积大、偶联容量高，又具有磁响应性及超顺磁性，可以在恒定磁场下聚集和定位、在交变磁场下吸收电磁波产热，利用这些特性，磁性纳米颗粒被广泛应用于磁共振对比剂、磁靶向药物载体、细胞与生物分子分离、生物传感与检测以及磁感应肿瘤热疗等生物学领域。

纳米酶核酸检测试纸条的工作原理，是将能与待检核酸下游互补配对的核酸分子通过Biotin和Streptavidin固定在硝酸纤维素膜(NC膜)这一固相载体上作为检测线(T线)，将能与待检核酸上游互补配对的核酸分子通过Digoxigenin和抗Digoxigenin抗体固定在纳米酶上得到纳米酶探针，将能与纳米酶上的核酸互补配对的核酸分子通过Biotin和Streptavidin固定在NC膜上作为质控线(C线)。

当待测样品(如尿液)与纳米酶探针混合后，纳米酶探针上的核酸分子与待测样品中的目标核酸发生互补配对而形成纳米酶目标核酸复合物，然后利用纳米酶的磁性，将待测样本中的目标核酸分子进行富集，加入到96孔板的小孔中，接下来将纳米酶核酸检测试纸条插入，液体在吸水垫的作用下层析，当纳米酶目标核酸复合物层析到NC膜上的T线位置时，目标核酸的下游与T线上的核酸分子再一次互补配对而被捕获，由于纳米酶自身具有棕色因而能够在T线的位置显示条带，条带的深浅与待测液体中目标核酸的多少呈正相关。

此外，无论待测样品中是否有目标核酸，当纳米酶探针层析到NC膜上的C线位置时，此处固定的核酸都能与纳米酶探针上的核酸通过互补配对将其捕获，从而显示条带，以指示纳米酶探针和NC膜上的核酸分子均正常有效，达到了质控的目的。

发明内容

本发明涉及一种基于纳米酶的HPV16核酸检测试纸条，所述的试纸条上装有检测线、质控线、探针垫和吸收待测样品的样品垫。

(1)质控线位置装有如SEQ ID NO.2所示的核酸序列1’，

SEQ ID NO.2：5’-CAGTGATACAGGTGAAGATTTGGTAGATTT；

核酸序列1’的5’端标记Biotin，并与Streptavidin偶联；

(2)检测线位置装有如SEQ ID NO.3所示的核酸序列3，

SEQ ID NO.3：5’-TGTGTTAAATAATCATTATCATTTACTATA；

核酸序列3的5’端标记Biotin，并与Streptavidin偶联；

(3)如SEQ ID NO.1所示的核酸序列1与纳米酶探针偶联装于探针垫上，

SEQ ID NO.1：5’-AAATCTACCAAATCTTCACCTGTATCACTG；

核酸序列1的3’端标记Digoxigenin，核酸序列1；

所述的Streptavidin(from Streptomyces avidinii)氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示：

SEQ ID NO.4：