[发明专利]基于二代测序技术精确检测液体活检个体突变的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种基于二代测序技术精确检测液体活检个体突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)根据从受试者采集的液体样品中的细胞游离DNA的长度对所述细胞游离DNA进行分类，得到具有第一长度范围和第二长度范围的两个细胞游离DNA组；

(2)从具有不同长度范围的细胞游离DNA组中选择所需的细胞游离DNA组，并分析所需的细胞游离DNA组中的基因突变情形；

(3)根据步骤(2)中得到的基因突变情形检测所述液体活检个体的突变，

其中，在步骤(2)中：

如果液体样品来自疾病早期的受试者，则将具有第二长度范围的细胞游离DNA组作为所需的细胞游离DNA组；

如果液体样品来自疾病晚期受试者，则将具有第一长度范围的细胞游离DNA组作为所需的细胞游离DNA组；

其中，所述方法为非诊断目的方法，所述疾病为肺癌，所述第一长度范围为130-160bp，所述第二长度范围为161-230bp，所述细胞游离DNA包含KRAS、EFGR和/或PIK3CA基因。

2.根据权利要求1所述的基于二代测序技术精确检测液体活检个体突变的方法，其特征在于，步骤(1)中的所述液体样品选自血液、唾液、尿液、组织液以及它们的分离物。

3.根据权利要求1所述的基于二代测序技术精确检测液体活检个体突变的方法，其特征在于，步骤(1)中利用凝胶电泳对所述细胞游离DNA进行分类，或者通过测序得到序列长度，并根据所得长度进行分类。

4.根据权利要求1所述的基于二代测序技术精确检测液体活检个体突变的方法，其特征在于，在步骤(1)中，根据从受试者采集的液体样品中的细胞游离DNA的长度对所述细胞游离DNA进行分类，得到具有所述第一长度范围的细胞游离DNA组和具有所述第二长度范围的细胞游离DNA组，且所述第一长度范围小于所述第二长度范围。

5.根据权利要求1所述的基于二代测序技术精确检测液体活检个体突变的方法，其特征在于，步骤(1)包括：

(1-1)提取液体样品中的细胞游离DNA；

(1-2)利用所述细胞游离DNA构建基因文库；

(1-3)通过凝胶电泳对得到的基因文库中的细胞游离DNA进行分类。

6.试剂在制备基于二代测序技术精确检测液体活检个体突变的试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂包括：

(1)从来自受试者的液体样品中提取细胞游离DNA的试剂；

(2)将所述细胞游离DNA分离为具有第一长度范围和第二长度范围的两个细胞游离DNA组的试剂；和

(3)分析包含KRAS、EFGR和/或PIK3CA的细胞游离DNA的基因突变的试剂；

所述基于二代测序技术精确检测液体活检个体突变的方法包括：

(1)根据从受试者采集的液体样品中的细胞游离DNA的长度对所述细胞游离DNA进行分类，得到具有第一长度范围和第二长度范围的两个细胞游离DNA组；

(2)从具有不同长度范围的细胞游离DNA组中选择所需的细胞游离DNA组，并分析所需的细胞游离DNA组中的基因突变情形；

(3)根据步骤(2)中得到的基因突变情形检测所述液体活检个体的突变，

其中，在步骤(2)中：

如果液体样品来自疾病早期的受试者，则将具有第二长度范围的细胞游离DNA组作为所需的细胞游离DNA组；

如果液体样品来自疾病晚期受试者，则将具有第一长度范围的细胞游离DNA组作为所需的细胞游离DNA组；

如果检测目的在于为受试者进行疾病早筛早诊，则将具有第二长度范围的细胞游离DNA组作为所需的细胞游离DNA组；

其中，所述疾病为肺癌，所述第一长度范围为130-160bp，所述第二长度范围为161-230bp。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述试剂进一步包括构建基因文库的试剂。