[发明专利]一种离子液体提取细胞膜蛋白的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种从生物样品中提取膜蛋白的方法，包括将生物样本匀浆分散，使用裂解液裂解细胞，使用两相提取试剂提取等步骤，其特征在将分散裂解后的样品与可与水混溶的离子液体接触，所述离子液体是1-十二烷基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐(C12MIMBF4), 1-乙烯基-3-乙基咪唑四氟硼酸盐(VEIMBF4), 1-乙烯基-3-乙基咪唑三氟甲烷磺酰亚胺盐(VEIMNTF2)或其混合物，或包含所述与水混溶的离子液体和至少一种其他溶剂的混合物。

2.根据权利要求1所述的方法，包括使用包含水混溶性离子液体和水的混合物。

3.根据权利要求2的方法，其特征在于包括以下步骤：1.在冰上将组织切成小块，使用预冷的TBS缓冲液反复清洗，除去不相关部分；2.对切成小块的组织进行低温机械匀浆，3.加入裂解缓冲液进行细胞裂解，离心弃上清，取沉淀加裂解缓冲液重悬.4. 重悬后的沉淀中加入离子液体提取液提取膜蛋白后离心，膜蛋白位于离心层的上清液中，真空低温蒸发离子液体后得到膜蛋白。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述膜蛋白包含两个或更多个跨膜区。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述生物样品是组织，细胞，细胞培养物样品，体液，细菌，真菌，病毒或植物。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于其中预先裂解所述生物样品的步骤，包括添加洗涤剂，表面活性物质或成孔剂用于裂解所述生物样品。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于裂解缓冲液成分为：300mM蔗糖，15mM NaCl，10mM Pipes (哌嗪-1,4-双（2-乙磺酸）),0.5mM EDTA, 1 mM DTT, 2 mM ATP, 0.025%洋地黄皂苷，pH 7.4；TBS: 50 mM Tris，150 mM. NaCl，pH 7.4。

8.根据权利要求3所述的方法，其中所述机械作用通过摇动或搅拌来实现。

9.根据权利要求3所述的方法，其中所述提取在4至37℃的温度下进行。

10.一种膜蛋白提取试剂盒试剂盒，其特征在于包含至少一种离子液体或包含所述离子液体的混合物，所述离子液体为1-十二烷基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐(C12MIMBF4), 1-乙烯基-3-乙基咪唑四氟硼酸盐(VEIMBF4), 1-乙烯基-3-乙基咪唑三氟甲烷磺酰亚胺盐(VEIMNTF2)或其混合物。