[发明专利]庆大霉素B生产菌及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201910108835.1 | 申请日： | 2019-02-03 |
| 公开（公告）号： | CN109897862B | 公开（公告）日： | 2020-10-02 |
| 发明（设计）人： | 柴保中;滕云;郑玲辉;何敏;叶小形;常莹莹;丁运坤;虞沂;刘天罡 | 申请（专利权）人： | 浙江海正药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/21;C12P19/48;C12N15/31;C12R1/29 |
| 代理公司： | 北京信诺创成知识产权代理有限公司 11728 | 代理人： | 陈悦军 |
| 地址： | 318000 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 庆大霉素 生产 及其 制备 方法 应用 | ||
1.庆大霉素B生产菌的构建方法，所述方法以棘孢小单孢菌Micromonosporaechinospora HS-1520-016-89为原始菌，以genR和genS基因序列置换了原基因组上的genK基因序列，并以强启动子启动genR和genS基因，其中，所述genR基因的DNA序列如SEQ IDNO:1所示，所述genS基因的DNA序列如SEQ ID NO:2所示，所述genK基因的DNA序列如SEQ IDNO:3所示；其中，棘孢小单孢菌Micromonospora echinospora HS-1520-016-89的保藏编号为CCTCC NO:M 2018898。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其中，所述强启动子选自kasOp*、SRL37、gapdhp-KR、SPL39、rpsLp-cf、SPL42。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其中，genR基因由启动子kasOp*启动，genS基因由启动子SRL37启动。
4.根据权利要求3所述的构建方法，包括：(1)构建基因工程改造质粒，所述质粒包含genK上游同源臂、kasOp*启动子、genR基因、SRL37启动子、genS基因和genK下游同源臂；(2)将所述质粒转化大肠杆菌；(3)混合培养转化的大肠杆菌和棘孢小单孢菌Micromonosporaechinospora HS-1520-016-89，得到接合转移的庆大霉素B生产菌。
5.庆大霉素B生产菌，其为棘孢小单孢菌Micromonospora echinospora HS-1520-016-89基因组中，genK基因被置换为genR和genS，且genR和genS由强启动子启动；其中，棘孢小单孢菌Micromonospora echinospora HS-1520-016-89的保藏编号为CCTCC NO:M2018898。
6.根据权利要求5所述的庆大霉素B生产菌，由权利要求1～4任一项所述的方法构建。
7.权利要求5或6所述的庆大霉素B生产菌在生产庆大霉素B中的应用。
8.权利要求5或6所述的庆大霉素B生产菌在生产以庆大霉素B为中间体的物质中的应用。
9.一种生产庆大霉素B的方法，包括使用权利要求5或6所述的庆大霉素B生产菌。
10.与庆大霉素B的合成相关的基因，所述基因为genR，其DNA序列如SEQ ID NO:1所示，和genS，其DNA序列如SEQ ID NO:2所示。
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