[发明专利]一种用于动物细胞种属鉴定的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用于动物细胞种属鉴定的试剂盒，其特征在于，包括：

(1)制胶粉剂；

(2)Tris-Gly电泳缓冲液粉剂；

(3)显色底物粉剂；

(4)细胞裂解液；

所述的制胶粉剂包括：EDTA 0.035～0.040g、琼脂糖0.8～0.9g，该粉剂使用时需用100ml Tris-Gly电泳缓冲液溶解混匀；

所述的Tris-Gly电泳缓冲液粉剂包括：甘氨酸7.055～7.065g、Tris粉1.5～1.6g，该粉剂使用时需用1L的水溶解混匀，pH为8.50～8.60；

所述的显色底物粉剂包括乳酸脱氢酶(LD)的显色底物粉剂和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的显色底物粉剂、苹果酸脱氢酶(MD)的显色底物粉剂、嘌呤核苷磷酸化酶(NP)的显色底物粉剂，其中乳酸脱氢酶(LD)的显色底物粉剂包括：乳酸钠1.08～1.15g、NAD 1.8～2.0mg、氯化钠2.5～3.0mg、MTT1.8～2.2mg、PMS 0.3～0.5mg；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的显色底物粉剂包括：G6PD 45～55mg、NADP 2.7～3.2mg、氯化镁9～13mg、MTT 1.7～2.0mg、PMS0.35～0.52mg；苹果酸脱氢酶(MD)的显色底物粉剂包括：苹果酸钠1.8mg～2.2mg、NAD 3.8～5.2mg、氯化钠2.0～2.7mg、MTT 2.1～2.5mg、PMS 0.2～0.5mg；嘌呤核苷磷酸化酶(NP)的显色底物粉剂包括：肌苷36～45mg、黄嘌呤酶1.2～1.8U、MTT 2.6～3.3mg、PMS 0.9～1.5mg；其中：LD显色底物粉剂使用时需用1.5mL的0.5mol/L Tris-HCl和2.0～2.5ml的纯水溶解；G6PD显色底物粉剂使用时需用2.0mL的0.5mol/L Tris-HCl和1.2～1.5ml的纯水溶解；MD显色底物粉剂和NP显色底物粉剂使用时需用2.5mL的0.5mol/L Tris-HCl和2.0～2.5ml的纯水溶解；所述使用的0.5mol/L Tris-HCl为Tris粉3.0g，使用时需添加浓盐酸1.0～1.2ml、纯水45～50ml，并调节pH至8.0；

所述的细胞裂解液为Triton X-100，使用时用Tris-Gly电泳缓冲液稀释50倍。

2.一种权利要求1所述的动物细胞种属鉴定的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：采用Tris-Gly电泳缓冲液配制的琼脂糖同工酶胶块，在室温、电压150～165V、电流52～55mA条件下，以人源细胞HeLa和小鼠源细胞L929为对照细胞，分别在琼脂糖同工酶胶块两边点样，通过20～35min电泳、3～5min孵化染色、纯水脱色，即可得到哺乳动物细胞同工酶的图谱。

3.根据权利要求2所述的使用方法，其特征在于，作为对照的人源细胞HeLa和小鼠源细胞L929，需要使用者自己准备，收集细胞，加入等体积的上述试剂盒中的细胞裂解液后，4℃条件下裂解后，将细胞裂解物置于-20℃保存备用。

4.根据权利要求2所述的使用方法，其特征在于，所述的琼脂糖同工酶胶块制备的粉剂采用EDTA0.035～0.040g、琼脂糖0.8～0.9g，将该粉剂用100ml Tris-Gly电泳缓冲溶液溶解混匀，倒入同工酶制胶的模具中，制成所需同工酶胶块。

5.根据权利要求2所述的使用方法，其特征在于，同工酶电泳的条件为室温、电压150～160V、电流50～55mA，电泳时间为25～30min。

6.根据权利要求2所述的使用方法，其特征在于，孵化染色中，LD显色底物粉剂使用时需用1.5mL的0.5mol/L Tris-HCl和2.0～2.5ml的纯水溶解，G6PD显色底物粉剂使用时需用2.0mL的0.5mol/L Tris-HCl和1.2～1.5ml的纯水溶解，MD显色底物粉剂和NP显色底物粉剂使用时需用2.5mL的0.5mol/L Tris-HCl和2.0～2.5ml的纯水溶解，并保证现配现用、避光37℃孵化。