[发明专利]一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒

权利要求书

1.一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒，其特征在于包括如下试剂：

含有磁珠的溶液，所述的磁珠为硅基或硅羟基磁珠，所述的磁珠溶液的浓度为50-100mg/mL；

蛋白酶K，所述的蛋白酶K的浓度为50-100 mg/mL；

polyA溶液，所述的polyA的浓度为10-50 mM；

去蛋白液，所述的去蛋白液中含有终浓度为1-3M的盐酸胍，终浓度为10-20 mM 的Tris-HCl，Tris-HCl的pH7.0-8.0，质量百分比浓度为20-40%的无水乙醇；

洗涤液，所述的盐离子溶液中含有终浓度为10-50 mM的 Tris-HCl，Tris-HCl的pH8.0-9.0，质量百分比浓度为5-10%的 PEG6000，200-500mM的 Nacl溶液；

洗脱液，所述的洗脱液中含有5-20 mM的 Tris-HCl，Tris-HCl的pH8.0-9.0，质量百分比浓度为0.1-0.5% 的Tween-20；

裂解液，所述的缓冲液中含有25-75 mM的 Tris-HCL，Tris-HCL的pH 8.0，3-5 M 的异硫氰酸胍，质量百分比浓度为5-15%的聚多卡醇，质量百分比浓度为0.5-1%的乙基苯基聚乙二醇，质量百分比浓度为15-25%的异丙醇。

2.采用上述的试剂盒提取核酸的方法，其特征在于包括如下步骤：

一个对细胞进行裂解和吸附核酸的步骤： 在2 mL离心管中加入300-500µL的样本，加入500-1000 µL裂解液、10-30 µL含有磁珠的溶液，20-50µL蛋白酶K、5-10µL polyA溶液，涡旋振荡1 min至样本充分混匀，然后颠倒混匀3-5min；

一个去除杂蛋白的步骤：将步骤1）的离心管放置于磁力架上静置1min，磁珠完全吸附后，吸去液体，将离心管从磁力架上取下，加入500 μL去蛋白液，振荡混匀1 min，将离心管放置于磁力架上静置30 秒，磁珠完全吸附后，吸去液体；

一个对盐离子进行洗涤的步骤：将步骤2）的离心管从磁力架上取下，加入700 μl洗涤液，振荡混匀1 min；

将离心管放置于磁力架上静置1min，磁珠完全吸附后，吸去液体；

一个对DNA进行洗脱的步骤：将步骤3）的离心管从磁力架上取下，加入50-100 μL洗脱液，振荡混匀，室温孵育3-5 min，期间颠倒混匀1-2次，将离心管放置于磁力架上静置1min，磁珠完全吸附后，将核酸溶液转移至一个新离心管中，完成核酸的提取。