[发明专利]人工皮肤替代物及其无支架自组装构建方法和用途

权利要求书

1.一种人工皮肤代替品，其特征在于，所述人工皮肤代替品包含作为制备原料的第一人源细胞和第二人源细胞，并由所述第一人源细胞和所述第二人源细胞叠加形成；并且，所述制备原料不含有支架结构。

2.根据权利要求1所述的人工皮肤代替品，其特征在于，所述人工皮肤代替品的第一人源细胞选自成纤维细胞或间充质干细胞；可选的，所述第一人源细胞选自成纤维细胞；优选的，所述第一人源细胞选自人皮肤成纤维细胞。

3.根据权利要求1或2所述的人工皮肤代替品，其特征在于，所述人工皮肤代替品的第二人源细胞选自角质形成细胞；优选的，所述第二人源细胞选自人表皮角质形成细胞。

4.一种人工皮肤代替品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

细胞培养步骤：将第一人源细胞和/或第二人源细胞作为制备原料进行培养；

无支架细胞来源的真皮替代物的形成步骤：将在所述细胞培养步骤中培养后的第一人源细胞作为所述无支架细胞来源的真皮替代物的形成步骤中的待培养细胞进行培养；

人工皮肤替代物的形成步骤：将在所述无支架细胞来源的真皮替代物的形成步骤中得到的第一人源细胞进行培养后，将所述第二人源细胞和所述第一人源细胞进行共培养，从而得到人工皮肤替代物；并且，

所述制备原料不含有支架结构。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一人源细胞选自成纤维细胞或间充质干细胞；可选的，所述第一人源细胞选自成纤维细胞；优选的，所述第一人源细胞选自人皮肤成纤维细胞。

6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述第二人源细胞选自角质形成细胞；优选的，所述第二人源细胞选自人表皮角质形成细胞。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述无支架细胞来源的真皮替代物中的所述细胞来源自成纤维细胞。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在所述第一人源细胞的培养步骤中，培养所述成纤维细胞的培养液为DMEM培养液；可选的，所述DMEM培养液为高葡萄糖DMEM培养液；优选的，所述DMEM培养液进一步含有胎牛血清；优选的，所述DMEM培养液中所述胎牛血清的重量体积比为2-20％；优选的，所述DMEM培养液中所述胎牛血清的重量体积比为10％。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在所述第二人源细胞的培养步骤中，培养所述角质形成细胞的培养液为DermaLife K培养液或KGM培养液。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在所述无支架细胞来源的真皮替代物的形成步骤中，所述成纤维细胞的起始接种浓度为0.2-2X10⁶个/孔；可选的，所述成纤维细胞的培养液为含有2-20％(重量体积比)的胎牛血清和10-200μg/mL抗坏血酸或其盐的DMEM培养液；优选的，所述胎牛血清的含量为10％；优选的，所述抗坏血酸或其盐的含量为100μg/mL；优选的，所述抗坏血酸或其盐选自2-磷酸-L-抗坏血酸或2-磷酸-L-抗坏血酸三钠盐。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述成纤维细胞的培养时间为2-6周；优选的，所述成纤维细胞的培养时间为4周；可选的，所述成纤维细胞的培养条件为在37℃、含有5％CO₂的条件下进行培养。

12.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述人工皮肤替代物的形成步骤中，将所述无支架细胞来源的真皮替代物的形成步骤，培养得到的成纤维细胞进行收集并更换培养液，加入所述角质形成细胞后，和所述成纤维细胞继续共培养。