[发明专利]一种具有抗菌活性的化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种具有抗菌活性的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将解淀粉芽孢杆菌的发酵液经离心，取上清，经甲醇萃取，制得萃取物；

所述的解淀粉芽孢杆菌来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种编号CGMCC1.936；

(2)将步骤(1)制得的萃取物经硅胶柱分离，用梯度有机溶剂石油醚/乙酸乙酯/丙酮/甲醇按照不同比例的混合溶剂，依次进行洗脱；最后将丙酮/甲醇混合洗脱溶液进行浓缩，经高效液相色谱分离，制得具有抗菌活性的糖苷化合物；

所述萃取物经硅胶柱分离，具体步骤是：将萃取物干燥后，所得干燥物经200目硅胶柱层析分离，样品与硅胶质量比为1：100，分别用十三个浓度梯度进行洗脱，十三个浓度梯度混合溶剂分别进行洗脱，十三个浓度梯度混合溶剂分别为石油醚、石油醚/乙酸乙酯＝80：20、石油醚/乙酸乙酯＝50：50、石油醚/乙酸乙酯＝20：80、乙酸乙酯、乙酸乙酯/丙酮＝80：20、乙酸乙酯/丙酮＝50：50、乙酸乙酯/丙酮＝20：80、丙酮、丙酮/甲醇80：20、丙酮/甲醇50：50、丙酮/甲醇20：80、甲醇；收集丙酮/甲醇80：20和丙酮/甲醇50：50的混合洗脱溶液；

所述具有抗菌活性的化合物的化学结构式如式I所示：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，解淀粉芽孢杆菌发酵液的制备步骤如下：

(i)将解淀粉芽孢杆菌接入LB肉汤培养基中，在35～37℃、180～200rpm条件下培养14～16h小时，制得种子液；

所述LB液体培养基，组份如下：

蛋白胨10克，氯化钠10克，酵母膏5克，水定容至1L；

(ii)将步骤(i)制得的种子液接种于发酵培养基中，接种量按体积百分比3～5％，在28～32℃、180～200rpm条件下培养44～52h小时，制得发酵液；

所述发酵培养基，组份如下：

葡萄糖30.0g，K₂HPO₄×3H₂O 7.0g，KH₂PO₄ 3.0g，(NH₄)₂SO₄ 1.5g，柠檬酸钠×3H₂O0.5g，MgSO₄×7H₂O 0.1g，氯化钠0.5g、可溶性淀粉0.1g；pH7.0～7.2，加水定容至1L。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，取上清后还包括浓缩的步骤。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的浓缩采用旋转蒸发浓缩，浓缩至原体积的8～12％。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，甲醇与需要萃取的液体的体积比为1:1。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述萃取次数为三次。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，高效液相色谱分离条件如下：

色谱柱为YMC-Pack ODS-A，规格250*10.0mml.O.D.S-5um，12nm；在体积百分比70％甲醇流动相，柱温25℃，流速1.5ml/min，254nm的紫外线检测的条件下，等浓度洗脱；收集化合物色谱峰，用琼脂扩散法确定抑菌活性所在时间段，经旋转蒸发浓缩，氮吹干燥，获得纯化的糖苷化合物。