[发明专利]一种赤红球菌发酵方法及其作为佐剂在动物疫苗中的应用

说明书

本发明涉及一种赤红球菌(CGMCC NO.17012 Rhodococcus ruber.GD0704A)的特有发酵工艺及其不同剂型佐剂制备工艺及作为佐剂在动物疫苗中的用途，该红球菌株分离自养殖场，经单菌落克隆纯化，鉴定获得，本发明提供了该菌株灭活制品作为动物疫苗佐剂应用时特有的发酵工艺，并提供了含该菌株及其制品的不同剂型佐剂制备工艺。经动物实验证实，采用上述工艺制备的佐剂制品用于单价或多联多价动物疫苗时，特别是新城疫灭活疫苗，禽流感灭活疫苗，猪瘟活疫苗具有明确的非特异免疫增强作用，具体表现为动物疫苗诱导的抗体峰值水平显著提高，产生保护性抗体水平的时间提前，抗体维持期延长，增强动物疫苗的免疫效果。

技术领域

本发明涉及微生物学与免疫学技术领域，具体涉及一种赤红球菌(保藏号为：CGMCC NO.17012 Rhodococcus ruber.GD0704A)的具体发酵方法以及其作为佐剂在动物疫苗制备中的应用。

背景技术

近年来随着家畜、家禽养殖量的日益增多，动物疫病随之日益严重。特别是随着高致病性禽流感的爆发，动物用灭活疫苗特别是油乳剂灭活疫苗已经成为最重要的疫苗种类。目前动物用灭活疫苗虽然方法较为成熟，但是其极易受到灭活抗原质量品质的影响，特别是高质量油乳剂灭活疫苗目前只能通过高倍浓缩抗原来实现，以禽流感油乳剂灭活疫苗为例，高品质的禽流感油乳剂灭活疫苗，特别是多价的油乳剂灭活疫苗，存在生产资料消耗量大，工作人员容易过劳，能耗消耗严重，批次间差异大等问题，导致生产成本高昂并且严重制约产能，不能有效满足市场需求，并且不符合现代生物制品产业低碳环保的发展需要，更重要的是疫苗质量不稳定可能导致免疫失败，进而使疫病爆发，蔓延，因而需要配合高效的佐剂才能发挥疫苗良好的免疫效果。

佐剂主要指非特异性免疫刺激剂，其与疫苗抗原配合使用后能增强动物机体对疫苗制品应答反应。目前常用的佐剂主要有：铝佐剂，矿物油佐剂，灭活的结核分枝杆菌(卡介苗)，聚肌胞等。目前佐剂普遍存在以下问题：(1)铝佐剂即氢氧化铝胶佐剂，是目前商品化的动物疫苗佐剂，其主要通过铝胶-抗原复合物形式在注射部位形成抗原池进而发挥缓释效应，该佐剂主要用于细菌性疫苗；(2)矿物油佐剂是油乳剂灭活疫苗主要组分，矿物油目前常用美孚或埃索等品牌矿物油，抗原与矿物油采用乳化方法制成油乳剂灭活疫苗，其免疫抗体维持久，但是抗体产生速度较慢，容易形成免疫空窗期；(3)灭活的结核分枝杆菌(BCG)佐剂，采用减毒的卡介苗(BCG)经热灭活处理后制备的佐剂，是弗氏完全佐剂的主要组分，其常用于动物高免阳性血清的制备，但其易引发动物不良反应或局部肉芽肿病变等，因此国内外均禁止其用于商品疫苗；(4)聚肌胞即双链聚核苷酸(Poly I：C)为抗肿瘤药物，鉴于其在动物体内半衰期短，并且相对短效，其作为动物用灭活疫苗免疫佐剂局限性较大。