[发明专利]一种抗体-蒜酶的偶联物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗体‑蒜酶偶联物及其制备方法和应用，属于肿瘤靶向治疗技术领域，所述抗体‑蒜酶偶联物中抗体和蒜酶通过酰胺键偶联；所述抗体为肿瘤细胞特异性表面抗原的抗体；所述抗体‑蒜酶偶联物的制备方法包括以下步骤：1)将抗体与碳二亚胺、N‑羟基硫代琥珀酰亚胺混合活化，获得羧基活化的抗体溶液；2)将所述羧基活化的抗体溶液与蒜酶溶液混合进行偶联反应，获得抗体‑蒜酶偶联物。本发明提供的抗体‑蒜酶偶联物具有肿瘤细胞靶向性，不对正常细胞造成任何影响，能够应用于制备靶向肿瘤细胞药物。

技术领域

本发明属于肿瘤靶向治疗技术领域，尤其涉及一种抗体-蒜酶偶联物及其制备方法和应用。

背景技术

大蒜(Allium sativumL.)为百合科葱属植物蒜的鳞茎，是一种具有悠久历史的药食两用植物。蒜氨酸裂解酶(Alliinase，EC4.4.1.4)简称蒜酶，是用来催化大蒜中活性成分蒜氨酸，使其裂解生成大蒜辣素，大蒜辣素是目前公认的大蒜活性成分，具有多种药理活性作用。但由于大蒜辣素不稳定，成药困难，大蒜辣素无法实现其应用价值。

Legumain，又称天冬酰胺内肽酶(Asparaginyl endopeptidase，AEP)，是半胱氨酸蛋白酶C13家族一个新成员。正常情况下，Legumain在哺乳类动物不表达或仅低水平表达。Legumain在人乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌及中枢神经系统恶性肿瘤等组织中均呈高表达，但在相应的正常组织中不表达或表达水平较低，Legumain与肿瘤的转移、侵袭和扩散等密切相关，Legumain在体外几乎检测不到，它的表达是高度依赖于肿瘤环境。Legumain在大多肿瘤细胞系，分布在细胞质、细胞核、溶酶体以及条件培养基中，所以Legumain在靶向化疗中可以作为重要的靶标。单克隆抗体对抗原有高特异性和亲和力，但抗体对肿瘤特异性抗原往往缺乏治疗活性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗体-蒜酶偶联物及其制备方法和应用，所述抗体-蒜酶偶联物能够有选择性地作用于肿瘤细胞表面抗原，在体外给予蒜氨酸，使肿瘤细胞原位释放大蒜辣素，从而产生杀伤肿瘤细胞的作用。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种抗体-蒜酶偶联物，所述抗体和蒜酶通过酰胺键偶联；所述抗体为肿瘤细胞特异性表面抗原的抗体。

优选的，所述抗体为天冬酰胺内肽酶抗体。

本发明提供了所述的抗体-蒜酶偶联物的制备方法，包括以下步骤：

1)将抗体与碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺混合活化，获得羧基活化的抗体溶液；

2)将所述羧基活化的抗体溶液与蒜酶溶液混合进行偶联反应，获得抗体-蒜酶偶联物。

优选的，步骤1)中所述活化的时间为30～40min。

优选的，步骤1)中所述活化的过程伴随搅拌。

优选的，步骤1)中所述活化后，还包括超滤离心活化后的料液，收集上层液体为羧基活化的抗体溶液。

优选的，所述超滤离心的截留分子量为9～11KD。

优选的，步骤2)中所述偶联反应过程中混合液的pH为8～9；所述偶联反应的时间为2～4h。

优选的，步骤2)中所述蒜酶溶液的浓度为15～25mg/mL；所述蒜酶溶液的溶剂为PBS缓冲液。

本发明提供了所述的抗体-蒜酶偶联物在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。

本发明的有益效果：本发明提供的抗体-蒜酶偶联物，将肿瘤细胞特异性表面抗原的抗体与蒜酶偶联，使所述抗体-蒜酶偶联物能够选择性的聚集在肿瘤细胞表面，当在体外给予蒜氨酸后，使蒜氨酸在肿瘤细胞表面原位释放大蒜辣素，从而产生特异性杀伤肿瘤细胞的作用。