[发明专利]一种利用苎麻BnXTH5基因提高植物镉敏感性的方法

说明书

一种利用苎麻BnXTH5基因提高植物镉敏感性的方法，将苎麻BnXTH5基因在拟南芥中进行过表达。通过本发明方法可实现利用苎麻BnXTH5基因有效提高拟南芥的镉敏感性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用苎麻BnXTH5基因实现提高植物镉敏感性的方法。

背景技术

植物细胞壁是由半纤维素、纤维素、果胶等多糖及木质素等物质构成的动态变化结构，它不仅在植物生长发育起作用，而且起到对重金属物质的感知上发挥重要作用。当植物遭受重金属胁迫时，细胞壁优先感知胁迫，并自身吸附超过一半的重金属。细胞壁组分半纤维素在铝的毒性/耐受性中具有重要作用。木葡聚糖内转葡糖酶/水解酶(XTH)是一种重要的半纤维素修饰酶。XTH的基因家族已经在多种物种中被鉴定出来，例如拟南芥(33个)、番茄(25个)、水稻(29个)。按其蛋白质结构特征，可将XTH蛋白和编码它们的基因被分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三类，Ⅰ和Ⅱ类XTH具有转糖基酶活性，Ⅲ类XTH具有水解酶活性。在拟南芥中发现XTH31 T-DNA插入突变体XTH31比野生型更耐Al，通过实验证明XTH31与Al的敏感性有关。

苎麻是种优质、高产、多年生的广泛栽培的纤维作物，具有很高的重金属镉的耐性能力。研究苎麻BnXTH5基因在植物敏感性的作用，揭示植物对镉敏感的机制，可以更加深入提高苎麻对重金属的耐性。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种利用苎麻BnXTH5基因提高植物镉敏感性的方法，实现利用苎麻BnXTH5基因有效提高拟南芥的镉敏感性。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种利用苎麻BnXTH5基因提高植物镉敏感性的方法，将苎麻BnXTH5基因在拟南芥中进行过表达。

进一步地，所述方法具体包括如下步骤：

S1、PCR扩增BnXTH5基因，并利用BamHI/SacI酶切位点将其克隆到PBI121载体上，得到BnXTH5基因过表达载体；

S2、利用EHA 105农杆菌通过浸花法转化拟南芥。

更进一步地，步骤S1中PCR扩增BnXTH5基因的具体过程为：

以BnXTH5 Forward primer、BnXTH5 Reversed primer为引物，苎麻湘苎3号cDNA为模板进行BnXTH5基因克隆，得到BnXTH5完整的开放阅读框；

PCR仪的程序为：95℃5min，94℃30s、60℃30s、72℃50s，40个循环,72℃7min；

引物BnXTH5 Forward primer、BnXTH5 Reversed primer序列如下：

BnXTH5 Forward primer：cgGGATCCATGGCATATCTTCAGGACAAAC；

BnXTH5 Reversed primer：cGAGCTCTCAATTGCACTCCGGAGGCAT。

进一步地，步骤S2的具体过程为：

将携带有步骤S1中得到的BnXTH5基因过表达载体的EHA105农杆菌摇菌至OD₆₀₀＝1.3，高速离心加入含0.03％Silweet-77的1/2MS液体培养基重悬得到重悬液，使其终浓度为OD＝0.8；放置2h后，将未开放的拟南芥花序完全浸入重悬液中30s,斜置黑暗24h后，正常培养收获种子。

本发明的有益效果在于：通过实验证明，本发明方法通过将苎麻BnXTH5基因在拟南芥中进行过表达，有效提高了拟南芥的镉敏感性。

附图说明