[发明专利]非复制型转导颗粒和基于转导颗粒的报告系统

说明书

提供了用于将报告核酸分子包装到非复制型转导颗粒内，用作报告分子的方法和系统。非复制型转导颗粒可以由病毒构建，并且使用病毒转导和复制系统。报告核酸分子包括用于检测靶基因或细胞的报告基因，例如报告分子或可选择标记物。提供了使用非复制型转导颗粒作为报告分子用于检测细胞和靶核酸分子的方法和系统。

发明背景。

发明领域

本发明涉及用于将非复制型转导报告分子包装和递送到细胞内，用于检测细胞中的靶基因的方法和组合物。

相关技术的描述

转导颗粒指能够将非病毒核酸递送到细胞内的病毒。基于病毒的报告系统已用于检测细胞的存在，并且依靠病毒的溶原期，以允许报告分子由细胞表达。这些基于病毒的报告系统使用具有复制能力的转导颗粒，其表达报告分子，并且促使靶细胞发出可检测信号。

然而，病毒的裂解周期已显示对基于病毒的报告测定是有害的。Carrière等人，Conditionally replicating luciferase reporter phages: Improved sensitivity for rapid detection and assessment of drug susceptibility of Mycobacterium tuberculosis. Journal of Clinical Microbiology，1997. 35（12）: 第3232-3239页。Carrière等人开发了结核分枝杆菌（M. tuberculosis）/卡介苗（BCG）萤光素酶报告噬菌体，其裂解周期在30℃下被压制，但在37℃下是活性的。使用该系统，Carrière等人已证实使用具有压制裂解周期的噬菌体报告物的BCG检测。

然而，在基于细菌噬菌体的报告测定中，存在与压制但不消除细菌噬菌体的复制功能相关的缺点。首先，控制细菌噬菌体的复制功能强加了有限的测定条件。例如，当噬菌体在30℃的非容许温度下用于感染细胞时，由Carrière等人使用的报告噬菌体phAE40的裂解周期被阻遏。这个温度要求对报告测定强加了限制条件，因为靶细菌的最佳温度为37℃。这些限制条件阻碍了最佳测定性能。

此外，病毒的复制功能难以控制。在使用转导颗粒作为报告系统的过程中，病毒的复制应该被压制。例如，由Carrière等人报告的报告噬菌体phAE40的裂解活性被降低但未被消除，导致测定中的萤光素酶信号下降。Carrière等人强调了关于所得到的报告信号下降的可能原因，例如完整噬菌体表达的基因和测定的温度限制，所有这些都起源于未消除噬菌体报告物的裂解周期的事实。

依靠噬菌体的天然溶原性周期的报告测定可以预计偶尔显示出裂解活性。另外，依靠噬菌体的溶原性周期的测定可能易于导致来自已经被相似噬菌体溶原化的靶细胞、以及靶向进入病毒核酸的天然存在的宿主限制系统的超感染免疫性，因此限制了这些报告噬菌体的宿主范围。